免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫部位,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。細(xì)胞融合采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。單克隆抗體在惡性癥調(diào)理中具有潛在的應(yīng)用價值。浙江PRR11多克隆抗體
1937年,Tiselius和Kabat用電泳方法將血清蛋白分為白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等組分,并發(fā)現(xiàn)抗體主要存在于γ區(qū),因此抗體又被稱為γ球蛋白。隨后,經(jīng)1968年和1972年的世界衛(wèi)生組織和國際免疫學(xué)會聯(lián)合會討論決定,將具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)一命名為免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig可分為分泌型Ig(secreted Ig,SIg)和膜型Ig(membrane Ig,mIg)。SIg主要存在于血液和組織液中,行使抗體的各種功能;mIg主要構(gòu)成B細(xì)胞膜表面的抗原受體。浙江PRR11多克隆抗體單克隆抗體在流感疫苗的生產(chǎn)中起到了重要作用。
抗體胃蛋白酶作用于鉸鏈區(qū)二硫鍵所連接的兩條重鏈的近c(diǎn)端,水解Ig后可獲得一個F(ab’)2片段和一些小片段pFc’。F(ab’)2是由兩個Fab段及鉸鏈區(qū)組成,由于Ig分子的兩個臂仍由二硫鍵連接,因此F(ab’)2片段為雙價,可同時結(jié)合兩個抗原表位,與抗原結(jié)合可發(fā)生凝集反應(yīng)和沉淀反應(yīng)。由于F(ab’)2片段既保留了結(jié)合相應(yīng)抗原的生物學(xué)活性,又避免了Fc段免疫原性可能引起的副作用,因而被普遍用于制備生物制品,如白喉抗有害素、破傷風(fēng)抗有害素均是經(jīng)胃蛋白酶消化后精制提純的生物制品。胃蛋白酶水解Ig后所產(chǎn)生的pFc 7然后被降解,無生物學(xué)作用 。
抗體規(guī)律:凡能產(chǎn)生抗體的高等動物(包括人類),當(dāng)注入胸腺依賴性抗原(TD抗原)進(jìn)行免疫時都有著相同產(chǎn)生抗體的規(guī)律,即存在初次免疫應(yīng)答(primary immune response)和再次免疫應(yīng)答(secondary immune response)。初次免疫應(yīng)答是指機(jī)體初次接觸某種抗原物質(zhì)引起特異性抗體產(chǎn)生的過程。其特點(diǎn)是潛伏期長(一周以上),產(chǎn)生的抗體滴度(效價)低、維持的時間短,產(chǎn)生的抗體以IgM為主;再次免疫應(yīng)答是指機(jī)體以后再次接觸同樣的抗原后所產(chǎn)生的抗體應(yīng)答過程。其特點(diǎn)是產(chǎn)生抗體的潛伏期短、抗體滴度高,維持的時問長,產(chǎn)生的抗體以IgG為主。非胸腺依賴性抗原(TI抗原)引起的體液免疫由于不產(chǎn)生記憶細(xì)胞,因此只有初次免疫應(yīng)答,沒有再次免疫應(yīng)答。多克隆抗體的制備過程通常包括免疫小鼠、收集細(xì)胞、混合細(xì)胞液以及純化抗體等步驟。
IgE抗體是人體內(nèi)非常重要的一類免疫球蛋白,在正常情況下,其含量是所有免疫球蛋白中很低的一種。但在病理情況下,如過敏性疾病,或寄生蟲傳染時,IgE水平可明顯升高。在過敏性疾病時,IgE可與致敏原結(jié)合,進(jìn)而再與肥大細(xì)胞,或嗜堿性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的受體結(jié)合,即可引起上述細(xì)胞脫顆粒,釋放白三烯和組胺類的物質(zhì),從而引起臨床上過敏反應(yīng)。在寄生蟲傳染時,IgE可與抗原結(jié)合,進(jìn)而再與嗜酸性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的受體結(jié)合。嗜酸性粒細(xì)胞活化后,通過ADCC的作用,可對寄生蟲進(jìn)行吞噬。除外,還有病理情況,如漿細(xì)胞瘤,即血液科較常見的多發(fā)性骨髓瘤,可出現(xiàn)IgE水平的升高,這時應(yīng)完善血尿、免疫固定電泳,判斷患者是否存在單克隆增生的免疫球蛋白,除外患者是否有血液系統(tǒng)的疾病。抗體的產(chǎn)生主要由B細(xì)胞負(fù)責(zé),它們可以識別并生成特異性的抗體以應(yīng)對傳染。浙江PRR11多克隆抗體
單克隆抗體可用于針對惡性癥細(xì)胞的免疫調(diào)理。浙江PRR11多克隆抗體
抗體特性和功能:IgM占血清Ig總量的5%~10%,血清濃度約為1mg/ml。單體IgM以膜結(jié)合型表達(dá)于B細(xì)胞表面,構(gòu)成B細(xì)胞抗原受體,只表達(dá)mlgM是未成熟B細(xì)胞的標(biāo)志。分泌型IgM為五聚體,是分子量很大的Ig,沉降系數(shù)為19S,稱為巨球蛋白(macroglobulin),一般不能通過血管壁,主要存在于血液中。五聚體IgM含有10個Fab段,具有很強(qiáng)的抗原結(jié)合能力;含有5個Fc段,比IgG更易啟動補(bǔ)體。天然血型抗體為IgM,血型不匹配的輸血,可導(dǎo)致嚴(yán)重的溶血反應(yīng)。IgM是個體發(fā)育過程中很早合成和分泌的抗體,在胚胎發(fā)育晚期的胎兒即能產(chǎn)生IgM,故臍帶血lgM升高提示胎兒有宮內(nèi)傳染(如風(fēng)疹病毒或巨細(xì)胞病毒等傳染)。IgM也是初次體液免疫應(yīng)答中很早出現(xiàn)的抗體,是機(jī)體抗傳染免疫的“先頭”;血清中IgM升高,提示新近發(fā)生傳染,可用于傳染的早期診斷;浙江PRR11多克隆抗體