由于蛋白質(zhì)的O-糖模式的異質(zhì)性和O-糖結(jié)構(gòu)的OpeRATOR特異性,形成了重疊的肽,從而可以獲得O-糖位點(diǎn)的完整圖譜為了進(jìn)行比較,相同材料的標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶消化物, 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進(jìn)行O-糖位點(diǎn)定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點(diǎn)的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會(huì)產(chǎn)生攜帶O-糖的糖肽,并能夠使用質(zhì)譜法進(jìn)行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級(jí)分析。下面是OpeRATOR消解位點(diǎn)的示意圖。倍篤生物代理多條產(chǎn)品線,用于聚糖分析用酶、ADC偶聯(lián)技術(shù)、QED抗體對(duì)、AAV中和抗體、IdeS蛋白酶等。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究
在抗體藥物及核酸藥物領(lǐng)域,倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程,主要用——RNA轉(zhuǎn)染試劑、生物活性物質(zhì)純化分離用填料產(chǎn)品、ADC的payload抗體(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、動(dòng)物造模用陽(yáng)性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio、工藝雜質(zhì)及外源污染物殘留檢測(cè)產(chǎn)品、抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德國(guó)BASF、美國(guó)QED、中國(guó)君研生物、中國(guó)金傳生物、中國(guó)毫厘科技、中國(guó)再帆生物等。這些國(guó)產(chǎn)品牌都具有國(guó)內(nèi)自研、自產(chǎn)能力,批次生產(chǎn)穩(wěn)定可靠、品質(zhì)可控,為行業(yè)發(fā)展提供更多國(guó)產(chǎn)選擇。浙江用于自動(dòng)化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)為了測(cè)試選擇性,將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與 GlycOCATCH 一起孵育:洗脫O-糖基化蛋白。
genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖:為了確認(rèn)依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù),進(jìn)行了釋放的N-聚糖分析。標(biāo)記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失,如半乳糖基化聚糖物種的信號(hào)丟失所示。該酶是一種有價(jià)值的工具,可降低樣品異質(zhì)性,用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復(fù)雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc;2. 實(shí)現(xiàn)完全糖基去除,以改善蛋白質(zhì)表征;3. 可固定在即用型離心柱中。
Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協(xié)同的作用:O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區(qū)域O-聚糖位點(diǎn)的覆蓋率(圖3)。使用OpeRATOR鑒定對(duì)應(yīng)于所有13個(gè)O-聚糖位點(diǎn)的肽,而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個(gè)位點(diǎn)。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR (1) 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好,此處由 S186 和 T245 位點(diǎn)缺乏消化來(lái)表明。此外,ImpaRATOR 在兩個(gè)相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解,如 S213 位點(diǎn)酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點(diǎn)酶解肽的低強(qiáng)度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品(T184-S199和T200-H204;圖2b和d),而在ImpaRATOR消化的樣品中,具有漏裂的相應(yīng)肽(S184-H204)的強(qiáng)度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點(diǎn)覆蓋率,但使用ImpaRATOR進(jìn)行消化可以表征O-聚糖結(jié)構(gòu),包括唾液酸化物種。例如,條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應(yīng)該與使用OpeRATOR的消化進(jìn)行比較,在OpeRATOR中,必須去除唾液酸才能產(chǎn)生酶活性,這意味著有關(guān)唾液酸化的信息丟失??偠灾琁mpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關(guān)聚糖組成和 O-聚糖位點(diǎn)的完整信息。親和純化微離心柱,SialEXO 凍干 200 單位,OpeRATOR 凍干 200 單位。
Core 1型O-聚糖的水解:O-糖基化不僅難以研究,其自然異質(zhì)性也會(huì)導(dǎo)致其他分析出現(xiàn)問(wèn)題。例如,由于樣品中存在許多不同的糖型,因此對(duì)完整或中等水平的重糖基化蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)譜分析可能非常困難。酶法去除N-聚糖的解決方案已經(jīng)存在多年,Genvois的PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰(zhàn)性,現(xiàn)有的O-糖釋放化學(xué)方法通常會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生重大修飾,因此不太適合下游分析。1. 用于方法開(kāi)發(fā)的靈活產(chǎn)品形式;2. 可以結(jié)合酶以提高效率;3. 適用于自動(dòng)化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。FucosEXO 是α-巖藻糖苷酶混合物。安徽N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)
OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗體;上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究
GlycOCATCH?親和純化:用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽親和純化的富集樹(shù)脂。GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供。該產(chǎn)品包含:4 個(gè) GlycOCATCH 親和純化微離心柱,每個(gè)柱能夠結(jié)合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白(總共 200 μg)。Genovis的SialEXO 凍干 200 單位,用于去除唾液酸;OpeRATOR 凍干 200 單位,用于結(jié)合的 O-糖蛋白的可選洗脫方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集;2. 復(fù)雜樣品的特異性凈化;3. 用于改進(jìn) MS 分析的樣品制備。O-糖基化蛋白和肽的特異性富集:O-連接聚糖參與多種生物過(guò)程,包括抑制病原體引起的gan染、炎癥反應(yīng)、造血和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究