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目前鑒定出15個(gè)外顯子,外顯子1起始密碼為atg,外顯子15的終止密碼子是tga(轉(zhuǎn)錄本:)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白,包含由六個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(domain,d)組成(d1-d6)的胞外段,一個(gè)疏水的跨膜段,三個(gè)免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs,itims)和一個(gè)itims樣序列組成的胞內(nèi)段。理論上講,pirb的分子量約為92kd,但是western-blot分析中,pirb經(jīng)常位于105kd處,因?yàn)閜irb是糖蛋白。以往研究發(fā)現(xiàn),pirb在免疫系統(tǒng)和中樞調(diào)節(jié)中均發(fā)揮重要作用。在免疫系統(tǒng)中,pirb在許多造血細(xì)胞都有表達(dá),包括b細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和樹突細(xì)胞,但是在胸腺細(xì)胞、成熟的t細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞不表達(dá)。動(dòng)物模型的意義和優(yōu)越性!酒精肝疾病動(dòng)物模型建模購(gòu)買
動(dòng)物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面。(一)避免了在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所帶來的風(fēng)險(xiǎn)臨床上對(duì)外傷、中毒、腫痛病因等研究是有一定困難的,甚至是不可能的,如急性和慢性呼吸系統(tǒng)疾病研究進(jìn)很難重復(fù)環(huán)境污染的作用。輻射對(duì)機(jī)體的損傷也不可能在人身上反復(fù)實(shí)驗(yàn)。而動(dòng)物可以作為人類的替難者,在人為設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件下反復(fù)觀察和研究。因此,應(yīng)用動(dòng)物模型,除了能克服在人類研究中經(jīng)常會(huì)遇到的理論和社會(huì)限制外,還容許采用某些不能應(yīng)用于人類的方法學(xué)途徑,甚至為了研究需要可以損傷動(dòng)物組織、或處死動(dòng)物。(二)臨床上平時(shí)不易見到的疾病可用動(dòng)物隨時(shí)復(fù)制出來臨床上平時(shí)很難收集到放射病、毒氣中毒、烈性傳染病等病人,而實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)研究目的要求隨時(shí)采用實(shí)驗(yàn)性誘發(fā)的方法在動(dòng)物身上復(fù)制出來。虹口區(qū)生殖疾病動(dòng)物模型建模廣泛應(yīng)用于藥效評(píng)價(jià)、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域。
水楊酸性胃潰瘍模型:大鼠禁食后水楊酸灌胃。4、結(jié)扎幽門法潰瘍模型:大鼠麻醉后在無菌技術(shù)下結(jié)扎幽門。此模型適合做探索抗?jié)儾∷幬镅芯亢臀笣儼l(fā)病機(jī)制方面的研究。三、動(dòng)物模型(animalmodelofhypertension)1、腎動(dòng)脈狹窄性模型:在腎動(dòng)脈上造成腎動(dòng)脈狹窄。如果是單側(cè)腎動(dòng)脈狹窄,則在間隔10~12d后將另一側(cè)腎摘除。手術(shù)幾天后,血壓開始升高,1~3個(gè)月后血壓升至高峰,并可長(zhǎng)期維持下去。2、腎外包扎性模型:腎外異物包扎,壓迫腎實(shí)質(zhì),造成腎組織缺血,使腎素形成增加,血壓上升。3、應(yīng)激性模型:應(yīng)激性大鼠模型常采用噪聲和足底電擊的復(fù)合刺激,每天2次,每次2h,約20d大鼠可形成
具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步闡述。本發(fā)明構(gòu)建了pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型,將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內(nèi)含子1內(nèi)。具體來說,構(gòu)建一個(gè)cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒,將其克隆進(jìn)入rosa26基因的內(nèi)含子1中。rosa26基因(ncbireferencesequence:)位于小鼠的七號(hào)染色體。本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法,具體按照以下步驟具體實(shí)施:步驟1、根據(jù)小鼠rosa26基因(genebank:))序列,利用cas-desigher軟件在1號(hào)內(nèi)含子設(shè)計(jì)grna靶序列,并搜索小鼠dbm-db基因組數(shù)據(jù)庫基因,采用crispr脫靶效應(yīng)軟件cas-offinder檢測(cè)潛在的脫靶位點(diǎn):**終選取兩個(gè)grna,grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如:seqid**:ggcaggcttaaaggctaacctgg將grna1和grna2分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級(jí)結(jié)構(gòu);步驟2、利用c57bl/6小鼠文庫bac克隆,通過pcr擴(kuò)增獲得pirb基因cds的同源臂,采用in-fusion方法構(gòu)建含有cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒的質(zhì)粒打靶載體,通過酶切、pcr及測(cè)序?qū)Υ虬匈|(zhì)粒載體進(jìn)行驗(yàn)證,圖1為構(gòu)建好的pirb基因打靶載體的示意圖。動(dòng)物疾病模型廣泛應(yīng)用于新藥靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)及篩選。
高脂飼料致高脂血癥大鼠模型高脂飼料致高脂血癥大鼠模型一、服務(wù)信息1、動(dòng)物模型名稱:高脂飼料致高脂血癥大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雄性4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:成年5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:180~220g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí)二、服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)周期價(jià)錢DH2017高脂飼料致高脂血癥大鼠模型4周詢價(jià)1、實(shí)驗(yàn)方法:大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)20天。分別于造模前和造模20天,測(cè)定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):造模20天后模型組大鼠血清TC、TG、HDLC、LDLC均**增加,與對(duì)照組比較具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三、交付標(biāo)準(zhǔn):1.提供動(dòng)物模型構(gòu)建過程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。四、服務(wù)項(xiàng)目說明:1、如有特殊要求,請(qǐng)另詢價(jià)。2、雙方簽訂合同后,收取70%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。查閱已有的相關(guān)小鼠模型綜述文獻(xiàn)。南通品質(zhì)好的疾病動(dòng)物模型建模
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r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’步驟4、鑒定為pirb基因敲入的f0代雄性小鼠7周齡、雌性小鼠6周齡分別與野生型異性小鼠交配獲得f1代雜合子小鼠,圖2為本發(fā)明f1代雜合子小鼠pirb基因敲除小鼠的流程圖,小鼠出生后20天進(jìn)行pcr鑒定,若有陽性小鼠出生,則表示轉(zhuǎn)基因已經(jīng)整合到生殖細(xì)胞。(1)通過pcr方法對(duì)獲得的f1代小鼠進(jìn)行基因型的鑒定:(a)dna的提取:方法1:采用takaraminibestuniversalgenomicdnaextractionkit()來獲得高純度的基因組dna。步驟a.每只小鼠剪下一段尾巴(2~5mm),放入離心管中,加入180μlbuffergl,20μl蛋白激酶k和10μlrnasea。步驟b.將步驟a離心管內(nèi)于56℃孵育過夜。步驟c.過夜后12000rpm離心2min去除雜質(zhì)。步驟d.加入200μlbuffergb和200μl無水乙醇,充分混勻。步驟e.將吸附柱放在收集管上,將步驟d得到的樣品加到吸附柱里,12000rpm離心2min,棄掉收集管中液體。步驟f.棄去液體后在吸附柱中加入500μlbufferwa,12000rpm離心1min,棄掉收集管中液體。步驟g.在收集管中加入700μlbufferwb,12000rpm離心1min。棄掉收集管中液體。注意:bufferwb需要與100%乙醇預(yù)混,沿管壁加入bufferwb沖走殘余的鹽。步驟h.重復(fù)步驟g一次。酒精肝疾病動(dòng)物模型建模購(gòu)買