使用本試劑盒所做結果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀或熒光酶標儀進行檢測，也可以用于高內涵篩選(High-ContentScreening,HCS)。對6孔板培養(yǎng)的細胞（每孔500μl的Click反應液）、96孔板培養(yǎng)的細胞（每孔50μl的Click反應液）、每管細胞數量為10-100萬的流式細胞儀檢測（每管500μl的Click反應液）以及冰凍或石蠟切片的檢測（每個樣品100-200μl的Click反應液），不同規(guī)格的本產品可以提供的反應的量詳見說明書中的表。光譜特性：488-Azide：綠色熒光，Ex/Em=491/518nm；Hoechst33342：藍色熒光，Ex/Em=346/460nm,boundtoDNA。EdU細胞增殖檢測試劑盒如何發(fā)揮重要作用？上海東寰告訴您。上海如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒公司

EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替T滲入正在復制的DNA分子，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性，通過檢測EdU標記便能準確地反映細胞的增殖情況。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在細胞和組織水平能更準確地反映細胞增殖等現象浙江品牌EdU細胞增殖檢測試劑盒原理使用EdU細胞增殖檢測試劑盒的好處有哪些？

傳統(tǒng)的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法需要DNA變性，抗原修復，抗原抗體過夜孵育，操作步驟復雜繁瑣。并且由于BrdU抗體分子較大，嵌入DNA分子中的BrdU無法直接與BrdU抗體結合，必須先進行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但變性的程度可能導致錯誤結果。如果變性不充分，會導致BrdU難以暴露，無法檢測，而且變性過程從邊緣向中間滲透，會導致細胞核DNA的變性不均勻，邊緣模糊不清。如果變性過分，則會導致DNA斷裂，甚至降解，導致核染不均一。另外，不同抗體試劑公司的抗體質量不一致，造成難以確保實驗重復性，且容易產生假陽性結果。

EdU細胞增殖檢測和BrdU細胞增殖檢測的對比。小分子化合物AndyFluor?azide與EdU之間的點擊化學(ClickChemistry)反應不需要DNA變性，就可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析，該反應不受雙鏈DNA中堿基對的影響，因此客戶了BrdU摻入法的弊端。圖2.使用EdU細胞增殖檢測試劑盒對細胞和組織的染色效果。使用10μMEdU處理A549細胞2小時，然后分別使用AndyFluor?488azide(綠色,上圖)、AndyFluor?594azide(紅色,中間圖)檢測細胞增殖活性，使用DAPI進行復染（藍色）。腹腔注射EdU到小鼠體內（每公斤小鼠注射5mgEdU），分別于0、12、24小時之后取小鼠腸組織，制成切片用AndyFluor?488azide(綠色,**下圖)檢測細胞的增殖情況，使用DAPI進行復染（藍色）。EdU細胞增殖檢測試劑盒的原理是什么？上海東寰告訴您。

EdU標記(a)將細胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標記培養(yǎng)基預熱，然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細胞可降低清洗強度EdU細胞增殖檢測試劑盒價格。湖南提供EdU細胞增殖檢測試劑盒公司

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搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ulTritonX-100細胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；染色反應液組分500ul1ml2ml5mlIX反應緩沖液430ul860ulmlml催化劑溶液20ul40ul80ul200ulTAMRA紅色熒光溶液ulul5ulul緩沖添加劑50ul100ul200ul500ul(d)每孔加入100ul配置好的檢測混合液，以覆蓋細胞為宜，避光、室溫孵育30分鐘。(e)棄染色反應液，加入300ulTritonX-100細胞滲透液清洗2-3次，每次10分鐘；(f)棄細胞滲透液，用PBS洗兩次，每次5分鐘。DNA染色(a)將Hoechst33342用PBS溶液1:1000進行稀釋得到終濃度為5ug/ml的lxHoechst染色液；(b)每孔加入300ul1xHoechst染色液，室溫避光孵育20-30分鐘后，棄染色液；(c)每孔加入300ulPBS洗細胞兩次，去掉洗液。上海如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒公司