在分子生物學(xué)研究中,RNA的完整性和純度是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要因素。5×RNALoadingBuffer作為一種專為RNA非變性凝膠電泳設(shè)計(jì)的上樣緩沖液,憑借其獨(dú)特配方和性能,為RNA分析提供了可靠的工具。產(chǎn)品特點(diǎn)高效沉降與指示功能5×RNALoadingBuffer的主要成分包括甘油、EDTA、溴酚藍(lán)和二甲苯青。甘油的高密度特性能夠使RNA樣品在凝膠電泳中順利沉入加樣孔,而溴酚藍(lán)和二甲苯青則作為指示劑,幫助實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)電泳進(jìn)程。無RNase污染該緩沖液經(jīng)過DEPC(焦碳酸二乙酯)處理,確保無RNase污染,從而有效保護(hù)RNA樣品免受降解,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。優(yōu)化的配方5×RNALoadingBuffer含有5mMEDTA,能夠螯合二價(jià)金屬離子,進(jìn)一步防止RNA在電泳過程中被降解。操作簡(jiǎn)便使用時(shí)只需將RNA樣品與1/4體積的5×RNALoadingBuffer混合,即可直接上樣電泳。這種簡(jiǎn)便的操作流程提高了實(shí)驗(yàn)效率。適用性該緩沖液適用于多種類型的RNA樣品,包括小分子RNA和長(zhǎng)鏈RNA,且在非變性條件下能夠保持RNA的天然結(jié)構(gòu)。穩(wěn)定的保存條件5×RNALoadingBuffer在-20℃條件下可保存兩年,室溫運(yùn)輸也不會(huì)影響其性能,這為實(shí)驗(yàn)室的長(zhǎng)期使用提供了便利。其作用位點(diǎn)相對(duì)局限,主要作用于高甘露糖型和部分雜合型 N - 連接糖鏈,對(duì)于復(fù)雜型 N - 連接糖鏈的作用較弱。Recombinant Human TFF1 Protein,hFc Tag
BstDNA聚合酶在等溫?cái)U(kuò)增中的優(yōu)勢(shì)主要包括以下幾點(diǎn):1.**高靈敏度和擴(kuò)增效率**:BstDNA聚合酶具有鏈置換能力,能夠在恒溫條件下快速、高效、特異性地?cái)U(kuò)增模板。翌圣生物的BstPlusDNAPolymerase靈敏度超高,低至5copies目的基因可測(cè),且始終能比競(jìng)品更快達(dá)到閾值,擴(kuò)增速率更快。2.**高dUTP耐受性**:BstPlusDNAPolymerase具有較高的dUTP耐受性,在反應(yīng)體系中添加dUTP對(duì)BstPlusDNAPolymerase的靈敏度及擴(kuò)增效率無影響,這使得它在防污染系統(tǒng)中表現(xiàn)出色。3.**快速擴(kuò)增**:使用BstDNA聚合酶的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如LAMP,可以在15-60分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)109-1010倍的擴(kuò)增,顯示出快速的擴(kuò)增能力。4.**熱穩(wěn)定性**:BstDNA聚合酶具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性,能在60-65℃的恒溫條件下保持活性,這使得它非常適合于不需要溫度循環(huán)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。5.**簡(jiǎn)化的反應(yīng)設(shè)置**:Bst3.0DNAPolymerase優(yōu)化了Loop-MediatedIsothermalDNAAmplification(LAMP)反應(yīng),簡(jiǎn)化了反應(yīng)設(shè)置,可以實(shí)現(xiàn)單酶RT-LAMP反應(yīng)。6.**抗抑制劑能力強(qiáng)**:Bst3.0DNAPolymerase即使在高濃度的擴(kuò)增抑制劑中,包括dUTP,也能展現(xiàn)出強(qiáng)大的性能。
一、產(chǎn)品特點(diǎn)(一)高靈敏度Probe qPCR Mix (2×) 采用了先進(jìn)的酶制劑配方,成分為經(jīng)過優(yōu)化的熱啟動(dòng)Taq酶。這種酶在常溫下處于抑制狀態(tài),只有在高溫條件下才被激發(fā),從而有效避免了非特異性擴(kuò)增的發(fā)生。其靈敏度極高,能夠準(zhǔn)確檢測(cè)到低至單個(gè)拷貝的核酸靶標(biāo),即使在樣本中目標(biāo)基因含量極低的情況下,也能輕松實(shí)現(xiàn)定量。例如,在對(duì)稀有細(xì)胞類型中的特定基因表達(dá)進(jìn)行分析時(shí),該試劑能夠快速且準(zhǔn)確地檢測(cè)到目標(biāo)基因的表達(dá)水平,為研究人員提供了可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。(二)高特異性該qPCR Mix的特異性主要得益于其獨(dú)特的探針設(shè)計(jì)和優(yōu)化的反應(yīng)體系。它與熒光探針配合使用,通過探針與目標(biāo)核酸序列的特異性結(jié)合來實(shí)現(xiàn)信號(hào)的檢測(cè)。這種探針檢測(cè)方式具有極高的特異性,能夠有效區(qū)分單個(gè)堿基的差異,從而避免了非特異性產(chǎn)物的干擾。在復(fù)雜的基因組背景下,即使存在高度同源的序列,該試劑也能準(zhǔn)確地識(shí)別并擴(kuò)增目標(biāo)基因,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。例如,在對(duì)病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)時(shí),即使病毒基因與宿主基因存在部分序列相似性,該試劑仍能準(zhǔn)確地檢測(cè)到病毒核酸,為病原體的快速診斷提供有力支持。
CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù),它們有一些關(guān)鍵的區(qū)別:1.**技術(shù)原理**:-**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:ChIC技術(shù)利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結(jié)合來進(jìn)行DNA切割。ChIC的優(yōu)勢(shì)在于使用TF特異性抗體系住MNase,并只在結(jié)合位點(diǎn)裂解。-**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:CUT&RUN技術(shù)則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復(fù)合物,留下寡核小體。CUT&RUN通過在冰上進(jìn)行簡(jiǎn)短的消化反應(yīng),在TF結(jié)合的MNase擴(kuò)散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質(zhì)之前在上清中恢復(fù)TF-DNA復(fù)合物。2.**操作步驟和簡(jiǎn)便性**:-**ChIC**:ChIC可能需要甲醛固定操作,這可能重新引入了ChIP-seq的一些問題,如交聯(lián)導(dǎo)致的DNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾。-**CUT&RUN**:CUT&RUN簡(jiǎn)化了操作步驟,使用磁珠固定細(xì)胞核,適用于新鮮和冷凍組織樣本,縮短了生成DNA測(cè)序文庫的時(shí)間(1-2天)。3.**背景信號(hào)和信噪比**:-**ChIC**:ChIC產(chǎn)生的背景信號(hào)可能較高,因?yàn)樗赡苌婕暗椒翘禺愋缘腄NA切割。
在PCR實(shí)驗(yàn)中,除了BsuDNAPolymerase,還有幾種聚合酶適合高溫?cái)U(kuò)增,包括:1.**TaqDNAPolymerase**:這是常用的PCR聚合酶,來源于Thermusaquaticus,能夠在72°C的比較好活性溫度下工作。它具有良好的熱穩(wěn)定性,可以承受PCR的熱變性步驟,且中途不需要再添加酶。2.**PfuDNAPolymerase**:來源于Pyrococcusfuriosus,具有出色的熱穩(wěn)定性和3'→5'外切酶活性,提供校正功能,適用于對(duì)PCR保真性要求較高的實(shí)驗(yàn),如基因篩選、克隆表達(dá)、突變檢測(cè)、定點(diǎn)突變等。3.**VentDNAPolymerase**:來源于Litoralis棲熱球菌,具有3'→5'外切酶活性,可以去除錯(cuò)配的堿基,具有校對(duì)功能,保真度比TaqDNAPolymerase高5~15倍。4.**KODDNAPolymerase**:來自Thermococcuskodakaraensis,具有高保真性和高熱穩(wěn)定性,保真性比PfuDNAPolymerase更高,優(yōu)化后的PCR反應(yīng)緩沖液能使得其擴(kuò)增速度達(dá)到Taq酶的2倍、Pfu酶的5-6倍。5.**BstDNAPolymerase**:來源于Bacillusstearothermophilus,具有3'到5'外切割活性,適用于等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如LAMP技術(shù),可在恒溫下進(jìn)行DNA擴(kuò)增,無需繁瑣的溫度循環(huán)。在某些糖蛋白的純化方案中,利用 Endo H 對(duì)糖鏈的特異性水解作用,去除糖蛋白上的糖鏈。Recombinant Human CEACAM-5/CD66e(His-Avi Tag)
GPRC5D蛋白在宿主細(xì)胞內(nèi)通過自組裝形成VLP。這一步驟通常在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生,以提高VLP的產(chǎn)量和質(zhì)量。Recombinant Human TFF1 Protein,hFc Tag
產(chǎn)品特點(diǎn)高靈敏度與特異性SYBRGreen是一種熒光染料,能夠特異性地結(jié)合到雙鏈DNA的小溝區(qū)域。在qPCR過程中,隨著DNA鏈的延伸,SYBRGreen的熒光信號(hào)不斷增強(qiáng),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)基因的實(shí)時(shí)定量。這種染料的結(jié)合特異性極高,確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。即使在低濃度的模板條件下,也能檢測(cè)到目標(biāo)基因的存在,靈敏度可達(dá)單拷貝水平。2×預(yù)混體系,操作簡(jiǎn)便該產(chǎn)品采用2×預(yù)混體系,預(yù)先將Taq酶、dNTPs、MgCl?等關(guān)鍵組分混合均勻,實(shí)驗(yàn)人員需加入引物和模板即可進(jìn)行反應(yīng)。這種預(yù)混體系簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作步驟,減少了人為誤差,同時(shí)保證了反應(yīng)體系的均一性和穩(wěn)定性。無論是初學(xué)者還是經(jīng)驗(yàn)豐富的研究人員,都能輕松上手,快速開展實(shí)驗(yàn)。低ROX參比染料,減少背景干擾ROX染料作為qPCR反應(yīng)中的參比染料,用于校正孔間熒光信號(hào)的差異。然而,過高的ROX濃度可能會(huì)引入背景熒光,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。SYBRGreenqPCRMix(2×,LowROX)采用了低濃度的ROX染料,有效降低了背景干擾,提高了熒光信號(hào)的信噪比,使得定量結(jié)果更加精確可靠。Recombinant Human TFF1 Protein,hFc Tag