DNA片段大小對磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的回收率有影響。根據搜索結果,我們可以得出以下結論:1.**小片段DNA(小于200bp)**:對于小于200bp的DNA片段,回收率會下降。這是因為小片段的DNA與固相基質的結合力相對較弱,因此相對損失較大,導致回收率降低。在某些情況下,小于100bp的DNA片段的回收率可能只有30-60%。2.**中等大小片段DNA(200bp-4kb)**:在這個范圍內的DNA片段,通常回收率較高,可以達到80-95%。這是因為這些片段大小適中,既不會因太小而損失,也不會因太大而難以洗脫。3.**大片段DNA(大于4kb)**:對于大于4kb的DNA片段,回收率也會下降,通常在30-50%之間。這是因為大片段的DNA與固相基質的結合力更強,因此更難洗脫。4.**片段大小與回收率的關系**:DNA片段越大,和固相基質的結合力越強,就越難洗脫,回收率就越低。相反,DNA的量越少,相對損失越大,回收率也越低。5.**操作技巧**:為了提高回收率,可以采取一些操作技巧,比如減少切膠體積、確保溶膠徹底、使用合適的洗脫液體積和pH值等。
CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質-DNA相互作用的技術,它們有一些關鍵的區別:1.**技術原理**:-**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:ChIC技術利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結合來進行DNA切割。ChIC的優勢在于使用TF特異性抗體系住MNase,并只在結合位點裂解。-**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:CUT&RUN技術則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復合物,留下寡核小體。CUT&RUN通過在冰上進行簡短的消化反應,在TF結合的MNase擴散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質之前在上清中恢復TF-DNA復合物。2.**操作步驟和簡便性**:-**ChIC**:ChIC可能需要甲醛固定操作,這可能重新引入了ChIP-seq的一些問題,如交聯導致的DNA和蛋白質的化學修飾。-**CUT&RUN**:CUT&RUN簡化了操作步驟,使用磁珠固定細胞核,適用于新鮮和冷凍組織樣本,縮短了生成DNA測序文庫的時間(1-2天)。3.**背景信號和信噪比**:-**ChIC**:ChIC產生的背景信號可能較高,因為它可能涉及到非特異性的DNA切割。
蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase)是一種特殊的融合蛋白,它結合了蛋白A和微球菌核酸酶(MNase,MicrococcalNuclease)的特性。以下是pA-MNase的一些關鍵特點和應用:1.**融合表達產物**:pA-MNase是蛋白A與微球菌核酸酶MNase的融合表達產物,因此它同時具有ProteinA的抗體結合活性和MNase的核酸內切酶活性。2.**雙重功能**:由于其雙重功能,pA-MNase常用于蛋白質-DNA相互作用研究,特別是在ChIC(ChromatinImmunocleavage)和CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)技術中。3.**ProteinA的特性**:ProteinA是一種發現于金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的細胞壁表面蛋白,分子量為42kDa,能特異性地與哺乳動物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)結合,通常結合部位為免疫球蛋白的Fc區。4.**微球菌核酸酶(MNase)的特性**:MNase是一種核酸內切酶,能夠降解核酸,常用于降解蛋白質制備中存在的核酸,減少細胞裂解液的粘度,以及用于染色質結構分析和快速RNA測序。5.**反應條件**:MNase的反應條件包括1XMicrococcalNucleaseReactionBuffer,需要補充100μg/ml重組白蛋白,分子生物學級,并在37°C下孵化。
T7EndonucleaseI(T7EI)是一種特殊的DNA內切酶,具有以下特點:1.**識別錯配DNA**:T7EI能夠識別并切割不完全配對的DNA、十字型結構DNA、Holliday結構或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點**:T7EI切割錯配位點5'端的、第二或第三個磷酸二酯鍵。3.**靈敏度**:T7EI對錯配DNA的識別非常靈敏,能夠檢測并切割單堿基和多堿基的錯配。4.**應用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術導致的基因突變的鑒定。它通過識別錯配DNA來幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標效應。5.**直接電泳檢測**:T7EI的產物可以直接通過電泳進行檢測,這使得它在實驗操作中更為方便。6.**來源**:T7EI來源于大腸桿菌菌株,是一種麥芽糖結合蛋白(MBP)和T7核酸內切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:盡管T7EI在商業上使用時成本較高,但它在大規模樣本測試中,尤其是在基因突變鑒定方面,提供了一種有效的篩選方法。8.**特殊注意事項**:T7EI能夠識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導致的錯配DNA,但不能識別1bp的插入、缺失或突變。這些特點使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術的應用中。FnCas12a可以識別不同的PAM序列,例如5'-TTN-3',這增加了它可以靶向的基因組區域 。
BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一種來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillussubtilis)的DNA聚合酶。這種酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性,但缺失了5'-3'核酸外切酶結構域,因此它具有鏈置換活性,可以用于重組酶聚合酶擴增(RPA)等恒溫擴增技術。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些關鍵特性和應用:1.**活性定義**:在37°C條件下,30分鐘內將10nmol的dNTP摻入酸不溶性物質所需的酶量定義為1個活性單位(U)。2.**熱失活條件**:75°C,20分鐘。3.**酶保存液成分**:25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**儲存條件**:-25~-15°C保存,有效期2年。5.**注意事項**:-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性,BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配對的突出末端,因而不適用于生成平齊末端。-25°C時BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性,是同溫度下Klenow片段(3'-5'exo-)的兩倍。6.**應用**:-隨機引物法標記。-cDNA第二條鏈的合成。-單個dA的加尾。-鏈置換的DNA合成。Pfu DNA Polymerase在基因克隆中的應用:Pfu DNA Polymerase常用于基因克隆,確保DNA片段的高精度復制。Recombinant Mouse MARCO Protein,His Tag
Hifair? Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit :適用于從總RNA或mRNA模板合成鏈cDNA,具有高熱穩定性。Biotinylated Recombinant Human CD40/TNFRSF5(His-Avi Tag)
BsuDNAPolymerase(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶)與其他DNA聚合酶相比,具有一些獨特的特性和優勢:1.**鏈置換活性**:BsuDNAPolymerase保留了BacillussubtilisDNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性,但缺乏5'→3'核酸外切酶結構域,這使得它具有鏈置換DNA合成的能力。這種能力對于等溫擴增技術如重組酶聚合酶擴增(RPA)和環介導等溫擴增(LAMP)非常重要,因為它可以分離雙鏈DNA,允許新的DNA鏈的合成。2.**溫度穩定性**:BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性,這使得它適用于需要在較高溫度下進行的擴增反應,如RPA技術中的65°C反應條件。3.**無核酸外切酶活性**:BsuDNAPolymerase缺乏3'→5'和5'→3'核酸外切酶活性,這意味著它不會像某些其他聚合酶那樣在合成過程中具有校對功能。這可以減少非特異性擴增,提高擴增的特異性。4.**高靈敏度和特異性**:BsuDNAPolymerase在等溫擴增中展現出高靈敏度,能夠將微量核酸模板擴增到可檢測水平,同時保持高特異性。5.**簡化的操作流程**:與其他需要復雜操作和多個步驟的DNA聚合酶相比,BsuDNAPolymerase在等溫擴增技術中的應用簡化了操作流程,因為它不需要熱循環儀,這使得它適合現場快速檢測和診斷。