對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養基用,℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中,長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養基常在,℃15-30分鐘進行滅菌,某些對糖類要求較高的培養基,可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合;長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時,常需在培養基中加入少量螯合劑,避免培養基中產生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養基pH會發生改變(一般使pH降低),可根據所培養微生物的要求,在培養基滅菌前后加以調整。在配制培養基過程中,泡沫的存在對滅菌處理極不利,因為泡沫中的空氣形成隔熱層,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生,或適當提高滅菌溫度。pH值、消毒的溫度和時間制各的日期和制備者等,記錄應復制一份。長寧區生態即用型培養基基地
血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝***中起重要作用,如SeO3、硒等。血清培養基主要問題1.血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、***和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。2.血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續性受到限制。3.對大多數細胞,在體內狀態,血清不是它們接觸的生理學液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態,血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時***另一類細胞生長(表皮細胞)。4.血清含一些對細胞產生毒性的物質,如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌***等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。5.動物個體不同,血清產地、批號不同,每批質量差異甚大,其成分不能保持一致。6.取材中可能帶入支原體、病毒,對細胞產生潛在影響,可能導致實驗失敗或實驗結果不可靠性。7.大規模生產中,血清來源越來越困難。嘉定區個人即用型培養基銷售價格包括培養基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號。
蒸餾水)919mlSE培養基·6H2OFe—EDTA1mlA5solution1000×1mldistilledwater958mlSoilExtract(土壤提取液)配置方法取花園土未施過肥,加入蒸餾水1000毫升,瓶口用透氣塞封口,在水浴中沸水加熱2小時,冷卻數小時,在無菌條件下過濾,取上清液,將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000毫升。土壤提取液保存在4℃備用。CompositionoftheA5solutionAddto100mlofdistilledwater:(加入100ml的蒸餾水)(NH4):將EDTA和FeCl3·6H2O分別溶于水和HCl(),混勻即可。Na2EDTA1gdistilledwater50mlFeCl3·6H2O81mgHCl()50mlPr培養基Preparation:to997mLofglass-distilledwater,addgproteosepeptone,gagar,andthefollowingstocksolutions:workingsolutiong/()1mlA5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。***培養基薩市(Sabouraud’s)培養基蛋白胨10g,瓊脂20g,麥芽糖40g,水1000ml先把蛋白胨、瓊脂加水后,加熱,不斷攪拌,待瓊脂溶解后,加入40g麥芽糖(或葡萄糖),攪拌,使它溶解,然后分裝,滅菌,備用。本培養菌是培養許多種類***所常用的。馬鈴薯糖瓊脂培養基把馬鈴薯洗凈去皮,取200g切成小塊,加水1000ml,煮沸半小時后,補足水分。在濾液中加入10g瓊脂,煮沸溶解后加糖20g。
應重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養基,應先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發而丟失的水分,**后必須加以補足。培養基pH的初步調整培養基各成分完全溶解后,應進行pH的初步調正,因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,例如,牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會有***的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的**終pH,保證培養基的質量。pH調正后,還應將培養基煮沸數分鐘,以利培養基沉淀物的析出。培養基注意事項編輯語音培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、***及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果。培養基成分的稱取培養基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂。
如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。組織培養技術建立早期,體外培養細胞都是利用天然培養基。但是由于天然培養基制作過程復雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養基所替代。***使用的天然培養基是血清,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質在培養某些特殊細胞也是必不可少。血清種類目用于組織培養的血清主要是牛血清,培養某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養細胞的原因:來源充足、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養某種細胞時使用其他動物血清更合適。牛血清是細胞培養中用量**大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質**高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分**少。血清樣本血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。不要中斷。可將配方置于傍側,每稱完一種成分即在配方上做出記號。崇明區生態即用型培養基創新服務
一般均應盡量收集有關資料,加以比較核對,再依據自己的使用目的加以選用。長寧區生態即用型培養基基地
培養基制備基本方法編輯語音培養基配方的選定同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規定進行配制外,一般均應盡量收集有關資料,加以比較核對,再依據自己的使用目的加以選用,記錄其來源。培養基的制備記錄每次制備培養基均應有記錄,包括培養基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號。**終pH值、消毒的溫度和時間制各的日期和制備者等,記錄應復制一份,原記錄保存備查,復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。培養基成分的稱取培養基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂,**好一次完成,不要中斷。可將配方置于傍側,每稱完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側,每種稱取完畢后,即移放于右側。完全稱取完畢后,還應進行一次檢查。培養基各成份的混合和溶化培養基所用化學藥品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養基中,使細菌不易生長。**好使用不銹鋼鍋加熱溶化,也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動,以防焦化、如發現有焦化現象、該培養基即不能使用。長寧區生態即用型培養基基地
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