用于培養霉菌的加入蔗糖,用于培養酵母菌的加入葡萄糖),補足水分,分裝,滅菌,備用。把這培養基的pH值調到,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。豆芽汁培養基黃豆芽100g,瓊脂15g,葡萄糖20g,水1000ml洗凈黃豆芽,加水煮沸30分鐘。用紗布過濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解后放入糖,攪拌使它溶解,補足水分到1000ml,分裝,滅菌,備用。把這培養基的pH值調到,可用來培養細菌和放線菌。豌豆瓊脂培養基豌豆80粒,瓊脂5g,水200ml瓊脂取80粒干豌豆加水,煮沸1小時,用紗布過濾后,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用。食用菌菌種培養基馬鈴薯-蔗糖-瓊脂培養基20%馬鈴薯煮汁1000ml,蔗糖20g,瓊脂18g把馬鈴薯洗凈去皮后,切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200g,加水1000ml,煮沸20分鐘后,過濾。在濾汁中補足水分到1000ml,即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,補足水分,分裝,滅菌,備用。使用該培養基對pH值要求不嚴格,可以不測定。綜合馬鈴薯培養基20%馬鈴薯煮汁1000ml,磷酸二氫鉀3g,硫酸鎂,葡萄糖20g,維生素10mg,瓊脂18g先配制20%馬鈴薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解后補足水分。也受某些微生物代謝產物的影響。楊浦區介紹干粉培養基及配套試劑互惠互利
對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養基用,℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中,長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養基常在,℃15-30分鐘進行滅菌,某些對糖類要求較高的培養基,可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合;長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時,常需在培養基中加入少量螯合劑,避免培養基中產生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養基pH會發生改變(一般使pH降低),可根據所培養微生物的要求,在培養基滅菌前后加以調整。在配制培養基過程中,泡沫的存在對滅菌處理極不利,因為泡沫中的空氣形成隔熱層,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生,或適當提高滅菌溫度。楊浦區介紹干粉培養基及配套試劑互惠互利例如,在微生物單細胞蛋白的工業生產過程中。
培養基化學分類編輯語音培養基天然培養基天然培養基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養基。例如。牛肉膏蛋白胨培養基、麥芽汁培養基和LB培養基等。常用的天然有機營養物質包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養基成本較低,除在實驗室經常使用外,也適于用來進行工業上大規模的微生物發酵生產。固體培養基培養基組合培養基合成培養基是根據天然培養基的成分,用化學物質模擬合成、人工設計而配制的培養基。例如,高氏1號培養基和查氏培養基等。合成培養基有一定的配方,配制合成培養基時重復性強,但與天然培養基相比其成本較高,微生物在其中生長速度較慢,一般適于在實驗室用來進行有關微生物營養需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。[2]培養基半組合培養基指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。培養基物理分類編輯語音培養基液體培養基80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。培養基固體培養基一類配制成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。
兼性厭氧微生物在F值為+,在+。F值與氧分壓和pH有關,也受某些微生物代謝產物的影響。在pH相對穩定的條件下,可通過增加通氣量(如振蕩培養、攪拌)提高培養基的氧分壓,或加入氧化劑,從而增加F值;在培養基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質可降低F值。5、原料來源的選擇在配制培養基時應盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養基成分,特別是在發酵工業中,培養基用量很大,利用低成本的原料更體現出其經濟價值。例如,在微生物單細胞蛋白的工業生產過程中,常常利用糖蜜(制糖工業中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業中含有乳糖的廢液)、豆制品工業廢液及黑廢液(造紙工業中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等都可作為培養基的原料。再如,工業上的甲烷發酵主要利用廢水、廢渣作原料,而在我國農村,已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發酵生產甲烷作為燃料。另外,大量的農副產品或制品,如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發酵工業原料。6、滅菌處理要獲得微生物純培養,必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言,更是要進行嚴格的滅菌。二硫蘇糖醇等還原性物質可降低F值。
應重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養基,應先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發而丟失的水分,**后必須加以補足。培養基pH的初步調整培養基各成分完全溶解后,應進行pH的初步調正,因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,例如,牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會有***的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的**終pH,保證培養基的質量。pH調正后,還應將培養基煮沸數分鐘,以利培養基沉淀物的析出。培養基注意事項編輯語音培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、***及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果。兼性厭氧微生物在F值為+,在+。F值與氧分壓和pH有關。寶山區常見干粉培養基及配套試劑排名靠前
或加入氧化劑,從而增加F值;楊浦區介紹干粉培養基及配套試劑互惠互利
二、培養基培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調pH至,若pH值超過,則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制,可選用無血清培養基。四、***素為防止培養時期細菌的污染,可在培養基中添加適當***素,一般用量與組織細胞培養相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素(PHA)非增殖期的細胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細胞,但在離體培養過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。經實驗測定其分裂高峰分別于培養后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖,蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質起凝集作用。PHA***的細胞數隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細胞均被***為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。楊浦區介紹干粉培養基及配套試劑互惠互利
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