其重鏈序列見seqid**。改造實例2抗人cd52細胞培養抗體的改造本實施例將表達抗人cd52的人源化的igg1型campath-1h單抗的序列進行突變，然后進行表達和純化，得到改造抗體acd52-sh。如圖4所示，以表達campath-1h單抗重鏈的序列(圖4a)為模板，利用引物對primer2-3f/primer2-arr、primer2-arf/primer2-dsr、primer2-dsf/primer2-3r分別進行pcr獲得3個片段后，再通過重疊pcr進行拼接。引物對序列如下表所示。如圖4b，純化獲得的pcr產物在經過限制性內切酶ecori(gaattc)和naei(gccggc)處理后，插入表達質粒中，獲得表達重鏈的質粒(pma-c1h-hc)。序列中完成了l234a、l235r、p329d和a330s突變。測序確認pma-c1h-hc序列是正確的。將用于表達campath-1h輕鏈的質粒pm-c1h-lc與上述用于表達改造后campath-1h重鏈的質粒pma-c1h-hc進行等摩爾數混合，用pei共轉染處于對數生長期的293f細胞。在37℃、5％co2培養5天后，離心收集培養基。經過proteina親和層析、離子交換層析、脫鹽柱層析，獲得高純度的抗體產品，命名為acd52-(c1h-fab)-(fca)，簡稱acd52-sh，其重鏈序列見。對產品進行電泳檢查，結果如圖5所示，其中m為分子量標準(mwladder)，lane1和2為目標抗體。F12培養基支持多種細胞的生長和增殖。四川細胞培養基生產企業

    相對便宜，失敗率低，但易造成營養成分的流失。高壓**某些培養基（如MEM）可進行高壓**，例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，可在高壓**后加入。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺為保證高壓**的效果，**設備的驗證很關鍵，可高壓**的培養基在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達到**效果及營養成分的**小損失，因此不需將**時間延長。**大多數培養基采用～μm孔徑的微孔濾膜進行過濾**，并且已成為培養基**的發展方向，它可低限度地減少培養基的營養損失。細胞培養液的儲存條件一般為2－8℃、密閉、避光保存，但要注意如下幾點：1）過濾后的完全培養液，即添加了血清、谷氨酰胺、***等的培養液要盡快使用，一般在2－3周內使用完。培養液中的L-谷氨酰胺是不穩定的，不同溫度L－谷氨酰胺的降解。2）**后的未加L-谷氨酰胺等添加劑的培養基溶液，一般可在4℃保存6～9個月，也可冷凍保存，用時解凍3）高壓**后的培養基應置4℃保存，不能因為其可耐受高溫而忽略儲存溫度。4）添加某些生長因子、***等添加物，可能會改變培養液的儲存條件。青海細胞培養基價格DMEM高糖培養基是細胞培養的理想選擇。

    其他方法在一些實施方式中，還可以通過其他序列缺失、糖基化修飾和化學修飾等手段達到降低抗體與fc受體的親和力的目的。在一個推薦實施方式中，對抗體表達序列進行改造，表達和純化抗體的fab片段。在一個推薦實施方式中，對抗體表達序列中的n297進行突變，可以獲得重鏈無糖基化修飾的抗體(non-glycosylatedheavych**n，nghc)。在一個推薦實施方式中，用糖苷內切酶(endoglycosidase)對抗體進行處理，可以獲得糖基缺失或是糖基重排的抗體。在一個推薦實施方式中，用化學偶聯(conjugation)對抗體進行處理，可以獲得側鏈修飾或偶聯了形成空間位阻基團的抗體。可以理解，本發明所涉及的改造抗體方法不限于上述序列替換、點突變、序列插入、序列缺失、糖基化修飾和化學修飾這幾種，只要是經過蛋白質改造降低了與fc受體的親和力且不影響與目標分子的結合力的方法均可。抗體改造范圍在一些實施方式中，上述細胞培養用抗體為抗cd3抗體、抗cd16抗體、抗cd28抗體、抗cd52抗體或抗cd137抗體。例如，鼠抗人cd3的抗體ucht1、鼠抗人cd16的抗體3g8、鼠抗人cd28的抗體cd-28、鼠抗人cd52的人源化campath-1h單抗和抗人cd137的小鼠單抗4c1a9等。在一些實施方式中。

    霉菌數每1g不得超過50個。稱取樣品1g，加入無菌純化水10mL溶解，混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行，檢查項目為**數、霉菌數。檢查法采用平皿法。這是一個性能特性表述的要求。細胞培養基的功能就是培養哺乳類動物細胞，因此經過細胞培養效果的檢驗是產品***劣的直觀表述，這也是很多生物制*用戶要求的一項指標。目前國內尚無細胞培養和計數的法定方法，可參考《體外培養的原理與技術》中細胞計數法論述的內容給出。按產品說明書配制培養液進行細胞培養，前四天用含10％小牛血清的培養液培養，觀察細胞形態并計數，檢查細胞培養基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛血清的培養液維持培養，觀察細胞形態并計數，檢查細胞培養基中是否有不利細胞生長的***。本試驗用細胞為VERO細胞。四、細胞培養基的使用方法細胞培養基的種類繁多，細胞培養方式也較多，如何正確地使用培養基及**大程度地保持培養基的營養以維持細胞的生長，對每個培養者都很重要。培養基的使用依不同的培養基種類、培養方式、細胞種類的不同而存在差異。細胞培養液指細胞生長的液體環境，一般指完全培養液。F12培養基適用于復雜細胞培養實驗。

    圖9為培養實例2中原型抗體okt3與改造實例3制備的acd3-sh對nkt細胞擴增的曲線圖；圖10為培養實例3中采用改造抗體組擴增獲得的細胞與采用原型抗體組擴增獲得的細胞的流式細胞分析圖；圖11為應用實例1中試驗組nk細胞產品和對照組nk細胞產品對raji細胞的殺傷試驗結果圖；圖12為應用實例1中試驗組nk細胞產品和對照組nk細胞產品對bt-474細胞的殺傷試驗結果圖；圖13為應用實例1中試驗組nk細胞產品和對照組nk細胞產品對mcf7細胞的殺傷試驗結果圖；圖14為應用實例2中兩組小鼠體內的腫*成像信號強度圖；圖15為應用實例3中各組小鼠的存活曲線圖；圖16為應用實例3中各組小鼠的腫*成像圖。具體實施方式為了便于理解本發明，下面將對本發明進行更***的描述，并給出了本發明的較佳實施例。但是，本發明可以以許多不同的形式來實現，并不限于本文所描述的實施例。相反地，提供這些實施例的目的是使對本發明的公開內容的理解更加透徹***。除非另有定義，本文所使用的所有的技術和科學術語與屬于本發明的技術領域：的技術人員通常理解的含義相同。本文中在本發明的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在于限制本發明。DMEM培養基有助于優化細胞實驗條件。西藏F12細胞培養基

減血清培養基減少了實驗中血清帶來的變異性。四川細胞培養基生產企業

    培養至第12～20天收獲細胞，計數。結果討論在一個為期12天的試驗中，志愿者1(do**)的pbmc在使用acd3-sh時可以擴增(圖9a，空心圓圈)，而使用okt3時可以擴增(圖9a，實心圓)。在對志愿者2(donor2)pbmc的19天擴增試驗中，分別是491倍和251倍(圖9b)。結果顯示，改造抗體acd3-sh具有更高的激發nkt細胞擴增的活力。培養實例3nk細胞特異性擴增和純度檢測本測試取志愿者提供的血樣，分離pbmc后平均分為2份，分別用改造獲得的改造抗體acd3-sh、acd16-sh和acd52-sh(試驗組)和原型抗體okt3、acd16-3g8和campath-1h(對照組)進行培養，并刺激人pbmc中nk細胞(cd3-cd16+cd56+)的增殖，通過對細胞成分分析來比較抗體組的功能。材料人靜脈血，基礎培養基x-vivo15(lonza，04-418q)，擴增培養基(x-vivo15，il-21000iu/ml)，人血清(genimi，100-512)。細胞培養和檢測方法分離pbmc細胞，用基礎培養基調整細胞密度到1e6/ml。加入試驗組或對照組抗體、il-2(1000iu/ml)、人血清(5％)。在37℃、5％co2培養72小時。加入等體積的擴增培養基，繼續培養48小時。之后每隔48小時取樣計數，用擴增培養基稀釋細胞至，繼續培養。培養至第14天收獲細胞，用熒光抗體percpmouseanti-human-cd3(bdbiosciences。四川細胞培養基生產企業