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單通道膜片鉗技術

來源: 發布時間:2025-02-18

ePatch雖然設備非常小巧,但功能完備,傳統膜片鉗設備能做的實驗,用ePatch幾乎都能做。具有voltage-clamp,current-clamp,zerocurrent-clamp三種模式,自動電極電壓飄移補償,C-fast-C-slow-R-series-P/N補償,Bridgebalance補償等功能。可以做全細胞記錄也可以做單通道記錄,膜片鉗技術常做的離子通道電流,突觸后電流,動作電位檢測等實驗都能輕松實現。公司還為此開發了友好的控制和記錄軟件,筆者上手接觸了一下,發現跟AXON的軟件類似,并且程序編輯更為簡單易用。所記錄到的數據可以直接使用Clampfit進行分析,可以說對于使用過AXON設備的膜片鉗工作者來說,上手毫無難度。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*61小時隨時人工在線咨詢.了解離子通道的功能以及結構的關系對于從分子水平深入探討某些疾病措施等均具有十分重要的理論和實際意義。單通道膜片鉗技術

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膜片鉗技術是一種細胞內記錄技術,是研究離子通道活動的蕞佳工具,也是應用蕞很廣的電生理技術之一。該技術通過施加負壓將微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)的前列與細胞膜緊密接觸,形成GΩ以上的阻抗,使電極開口處的細胞膜與其周圍膜在電學上絕緣。被孤立的小膜片面積為μm量級,內中只有少數離子通道。玻璃微電極中含有一根浸入電解溶液中的導線,用于傳導離子。在此基礎上對該膜片施行電壓鉗位(即保持跨膜電壓恒定),如果單個離子通道被包含在膜片內,則可對此膜片上的離子通道的電流進行監測記錄。通過觀測單個通道開放和關閉的電流變化,可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量,并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。還可把吸管吸附的膜片從細胞膜上分離出來,以膜的外側向外或膜的內側向外等方式進行實驗研究。這種技術對小細胞的電壓鉗位、改變膜內外溶液成分以及施加藥物都很方便。德國可升級膜片鉗細胞功能特性滔博生物膜片鉗實驗外包,基因實力,蛋白細胞,免疫檢測,相關行業平臺,實地考察,數據可靠。

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1937年,Hodgkin和Huxley在烏賊巨大神經軸突細胞內實現細胞內電記錄,獲1963年Nobel獎1946年,凌寧和Gerard創造拉制出前列直徑小于1μm的玻璃微電極,并記錄了骨骼肌的電活動。玻璃微電極的應用使的電生理研究進行了重命性的變化。Voltageclamp(電壓鉗技術)由Cole和Marmont發明,并很快由Hodgkin和Huxley完善,真正開始了定量研究,建立了H一H模型(膜離子學說),是近代興奮學說的基石。1948年,Katz利用細胞內微電極技術記錄到了終板電位;1969年,又證實N—M接觸后的Ach以"量子式"釋放,獲1976年Nobel獎。1976年,德國的Neher和Sakmann發明PatchClamp(膜片鉗)。并在蛙橫紋肌終板部位記錄到乙酰膽堿引起的通道電流。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*42小時隨時人工在線咨詢.

把膜電位鉗位電壓調到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態充電電流調定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻)。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs,用于消除全細胞瞬態電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),然啟根據歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調節Rs旋鈕注意測定脈沖反應的變化,逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值,產生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應當在RS補整水平寫不穩定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準備資料收集和脈沖序列的測定。小片膜的孤立使對單個離子通道進行研究成為可能。

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膜片鉗技術是當前研究細胞膜電流及離子通道的蕞重要的技術。從技術層面來解釋的話,膜片鉗技術(patchclamp)是指利用鉗制電壓或者電流的方法(通常為鉗制電壓)來記錄細胞膜離子通道電活動的微電極技術。膜片鉗技術的原理為:使用一個一頭尖一頭粗的錐狀玻璃管,管中設有微電極,管的前列直徑約1.5~3.0μm,通過負壓吸引使前列口與細胞膜形成千兆歐姆級的阻抗封接,前列口內的細胞膜區域與周圍其他區域形成了電學分隔,然后人工鉗制此片區域細胞膜的電位,即可達到對膜片上離子通道電流的監測與記錄。離子通道探索之旅,從選擇膜片鉗開始!多通道膜片鉗高阻抗封接

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ePatch的一些設計亮點還包括:可以在軟件中用數據記錄實驗,不用帶專門的實驗筆記本,也不用擔心這個筆記本上記錄的內容找不到對應的數據,系統會一一對應。電壓電流刺激模式的編輯就更蠢了。很多模塊可以直接拖拽,并配有樣圖,讓你對自己編輯的程序一目了然。實時全電池參數估計,包括強大的密封電阻、膜電容、膜電阻等重要參數在線分析功能,包括電壓鉗模式下的I/Vgraph、eventdetection、FFT,電流鉗模式下的APthresholddetection、APfrequency、APslope等數據可以多種格式保存。如果你是程序員,可以支持使用Matlab進行數據分析。如果沒有這樣的經歷,就沒有問題。數據可以保存為Clampfit,以便直接分析。單通道膜片鉗技術