80年代初發(fā)展起來(lái)的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門(mén)控動(dòng)力學(xué)特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術(shù)的興起與應(yīng)用,使人們不僅對(duì)生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進(jìn)一步的了解,而且對(duì)于疾病和藥物作用的認(rèn)識(shí)也不斷的更新,同時(shí)還形成了許多病因?qū)W與藥理學(xué)方面的新觀(guān)點(diǎn)。膜片鉗技術(shù)是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(genecloning)并架齊驅(qū),給生命科學(xué)研究帶來(lái)了巨大的前進(jìn)動(dòng)力。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*27小時(shí)隨時(shí)人工在線(xiàn)咨詢(xún).膜片鉗通常由兩個(gè)平行的、彎曲的鉗臂組成,鉗臂的末端有一對(duì)夾持墊,可以?shī)A住薄片材料。美國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗研究
膜片鉗的基本原理則是利用負(fù)反饋電子線(xiàn)路,將微電極前列所吸附的一個(gè)至幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜的電位固定在一定水平上,對(duì)通過(guò)通道的微小離子電流作動(dòng)態(tài)或靜態(tài)觀(guān)察,從而研究其功能。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)膜電流固定的關(guān)鍵步驟是在玻璃微電極前列邊緣與細(xì)胞膜之間形成高阻密封,其阻抗數(shù)值可達(dá)10~100GΩ(此密封電阻是指微電極內(nèi)與細(xì)胞外液之間的電阻)。由于此阻值如此之高,故基本上可看成絕緣,其上之電流可看成零,形成高阻密封的力主要有氫健、范德華力、鹽鍵等。此密封不僅電學(xué)上近乎絕緣,在機(jī)械上也是較牢固的。又由于玻璃微電極前列管徑很小,其下膜面積只約1μm2,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,一般只有一個(gè)或幾個(gè)通道,經(jīng)這一個(gè)或幾個(gè)通道流出的離子數(shù)量相對(duì)于整個(gè)細(xì)胞來(lái)講很少,可以忽略,也就是說(shuō)電極下的離子電流對(duì)整個(gè)細(xì)胞的靜息電位的影響可以忽略,那么,只要保持電極內(nèi)電位不變,則電極下的一小片細(xì)胞膜兩側(cè)的電位差就不變,從而實(shí)現(xiàn)電位固定。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*28小時(shí)隨時(shí)人工在線(xiàn)咨詢(xún).進(jìn)口單通道膜片鉗廠(chǎng)家早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術(shù)作細(xì)胞內(nèi)電活動(dòng)的記錄。
細(xì)胞是動(dòng)物和人體的基本組成單元,細(xì)胞與細(xì)胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進(jìn)行的,離子和離子通道是細(xì)胞興奮的基礎(chǔ),亦即產(chǎn)生生物電信號(hào)的基礎(chǔ),生物電信號(hào)通常用電學(xué)或電子學(xué)方法進(jìn)行測(cè)量。由此形成了一門(mén)細(xì)胞學(xué)科———電生理學(xué)(electrophysiology),即是用電生理的方法來(lái)記錄和分析細(xì)胞產(chǎn)生電的大小和規(guī)律的科學(xué)。早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術(shù)作細(xì)胞內(nèi)電活動(dòng)的記錄。現(xiàn)代膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*54小時(shí)隨時(shí)人工在線(xiàn)咨詢(xún).
1980年,Sigworth、Hamill、Neher等在記錄電極內(nèi)施加負(fù)壓吸引,得到了10~100GΩ的高阻封接(gigaseal),降低記錄噪聲,實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜電位又記錄單通道電流。獲1991年Nobel獎(jiǎng)。1955年,Hodgkin和Keens應(yīng)用電壓鉗(Voltageclap)在研究神經(jīng)軸突膜對(duì)鉀離子通透性時(shí)發(fā)現(xiàn)放射性鉀跨軸突膜的運(yùn)動(dòng)很像是通過(guò)許多狹窄空洞的運(yùn)動(dòng),并提出了"通道"的概念。1963年,描述電壓門(mén)控動(dòng)力學(xué)的Hodgkin-Hx上模型(簡(jiǎn)稱(chēng)H-H模型)榮獲譜貝爾醫(yī)學(xué)/生理學(xué)獎(jiǎng)。1976年,Neher和Sakmann建立膜片鉗(Patchclamp)按術(shù)。1983年10月,《Single-ChannelRecording》一書(shū)問(wèn)世,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑。1991年,Neher和Sakmann的膜片鋪技術(shù)榮獲諾貝爾醫(yī)學(xué)/生理學(xué)獎(jiǎng)。屯流鉗素向細(xì)胞內(nèi)注入刺激電流,記錄膜電位對(duì)刺激電流的反應(yīng)。
膜片鉗技術(shù)是當(dāng)前研究細(xì)胞膜電流及離子通道的蕞重要的技術(shù)。從技術(shù)層面來(lái)解釋的話(huà),膜片鉗技術(shù)(patchclamp)是指利用鉗制電壓或者電流的方法(通常為鉗制電壓)來(lái)記錄細(xì)胞膜離子通道電活動(dòng)的微電極技術(shù)。膜片鉗技術(shù)的原理為:使用一個(gè)一頭尖一頭粗的錐狀玻璃管,管中設(shè)有微電極,管的前列直徑約1.5~3.0μm,通過(guò)負(fù)壓吸引使前列口與細(xì)胞膜形成千兆歐姆級(jí)的阻抗封接,前列口內(nèi)的細(xì)胞膜區(qū)域與周?chē)渌麉^(qū)域形成了電學(xué)分隔,然后人工鉗制此片區(qū)域細(xì)胞膜的電位,即可達(dá)到對(duì)膜片上離子通道電流的監(jiān)測(cè)與記錄。國(guó)內(nèi)外質(zhì)優(yōu)膜片鉗機(jī)構(gòu),滔博生物,7*24小時(shí)隨時(shí)人工在線(xiàn)咨詢(xún).進(jìn)口單通道膜片鉗廠(chǎng)家
膜片鉗通常用于實(shí)驗(yàn)室、制造業(yè)和電子工業(yè)等領(lǐng)域,用于夾持薄膜、塑料薄膜、金屬箔等材料。美國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗研究
膜片鉗技術(shù)是一種細(xì)胞內(nèi)記錄技術(shù),是研究離子通道活動(dòng)的蕞佳工具,也是應(yīng)用蕞很廣的電生理技術(shù)之一。該技術(shù)通過(guò)施加負(fù)壓將微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)的前列與細(xì)胞膜緊密接觸,形成GΩ以上的阻抗,使電極開(kāi)口處的細(xì)胞膜與其周?chē)ぴ陔妼W(xué)上絕緣。被孤立的小膜片面積為μm量級(jí),內(nèi)中只有少數(shù)離子通道。玻璃微電極中含有一根浸入電解溶液中的導(dǎo)線(xiàn),用于傳導(dǎo)離子。在此基礎(chǔ)上對(duì)該膜片施行電壓鉗位(即保持跨膜電壓恒定),如果單個(gè)離子通道被包含在膜片內(nèi),則可對(duì)此膜片上的離子通道的電流進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄。通過(guò)觀(guān)測(cè)單個(gè)通道開(kāi)放和關(guān)閉的電流變化,可直接得到各種離子通道開(kāi)放的電流幅值分布、開(kāi)放幾率、開(kāi)放壽命分布等功能參量,并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。還可把吸管吸附的膜片從細(xì)胞膜上分離出來(lái),以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。這種技術(shù)對(duì)小細(xì)胞的電壓鉗位、改變膜內(nèi)外溶液成分以及施加藥物都很方便。美國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗研究