培養基的配制:1、配料:在容器中加入少量水,按照配方稱取各種藥品,加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。2、溶解:淀粉溶解:少量冷水調成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3、調PH:用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養基調節到所要求的值。4、過濾:濾紙或棉花進行過濾。5、分裝:一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。(1)三角瓶:若作靜置培養,則100ml培養基/250ml的三角瓶,較多不能超過150ml培養基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養,則15-20ml培養基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。(2)試管分裝:液體培養基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度。固體斜面培養基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。6、包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。7、滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞,培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。牛肉浸液中加入適量的蛋白胨、氯化鈉、磷酸鹽,調節pH7.2~7.6,經滅菌處理后,即為基礎液體培養基。天津培養基滅菌 培養基制備儀
培養基的類別按照培養基的物理狀態分:培養基按其物理狀態可分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基三類。(1)古體培養基。是在培養基中加入凝固劑,有瓊脂、明膠、硅膠等。古體培養基常月于微生物分離、鑒定、計數和菌種保存等方面。(2)液體培養基。液體培養基中不加任何凝固劑。這種培養基的成分均勻,微生物能充按標準中規定的培養時間和溫度對接種后的平板進行培養,目標菌應呈現良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態,非目標菌應是微弱生長或無生長。中國臺灣觸摸屏培養基制備儀高壓蒸汽滅菌一般使培養基pH降低,應在配制培養基時加以調節。
培養基防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、病菌及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。另外,應將有毒區與無毒區嚴格分開,并有各自自立的空氣凈化系統及孵室,有毒區對無毒區應保持相對負壓,防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。
干粉培養基有哪些注意事項:①熔化培養基制備必須在玻璃容器中進行,如果使用銅或鐵器皿,會影響細菌的生長。②注意按照先加水再加顆粒干粉培養基順序,反之則不利于培養基溶解。③單在必要時進行加熱溶解操作,其加熱溫度也不要過高時間不要過長,主要原因是高溫會破壞瓊脂和培養基中的一些營養成分。④生產的干粉培養基和顆粒培養基都經過pH校準,使用時無需特殊驗證。因為高壓會影響pH值,則應在高壓后驗證pH值。⑤液體培養基通常是預先包裝好的,分裝時應注意每管的用量不得高于試管的三分之二。⑥高壓后冷卻至五六十度環境,再導入平板,否則會形成更多的水蒸氣,導致細菌分離數量。異養微生物的合成能力較弱,不能以CO2作為碳源或主要碳源,故應在培養基中至少添加一種有機物。
培養基的制備原則和要求:培養基是根據各類微生物生長繁殖的需要,用人工方法把多種物質混合而成的營養物。一般用來分離、培養菌類。常用的培養基有基礎培養基、增菌培養基、選擇培養基、鑒別培養基和厭氧培養基。在制備培養基時,應掌握如下原則和要求:(一)培養基必須含有細菌生長繁殖所需要的營養物質。所用的化學藥品必須純凈,稱取的份量務必準確。(二)培養基的酸堿度應符合細菌生長要求。按各種培養基要求準確測定調節pH值。多數細菌生長的適宜pH值為7.2~7.6,呈弱堿性。微生物只有在營養物質濃度及其比例合適時才能良好生長。中國臺灣觸摸屏培養基制備儀
培養平板培養基是被用于獲得微生物純培養的很常用的固體培養基形式。天津培養基滅菌 培養基制備儀
培養基的購置:從培養基自身的質量來看,不同生產廠家的產品,甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。對培養基的供應企業進行評價后選擇合格的供應商,這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業提供:培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料。天津培養基滅菌 培養基制備儀
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