鼠尾膠原,是一種天然培養基,它具有促進體外培養細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用,同時也是一種天然的黏附劑,當我們需要在培養瓶或培養皿內放置小玻片,制備細胞爬片時,可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培養瓶之中。有點學術了,聽不懂···貼壁,有什么意義?分散的單一細胞培養能夠比較理想地反映細胞的具體生物特性。選擇合適的培養基,可以解決培養中細胞脫落和細胞重聚的現象。鼠尾膠原,是一種細胞支持物,它是細胞外基質的主要成份,可直接或間接參與細胞的附著。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無菌下制備,純度達到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養皿的包被,特別適合普通細胞培養器皿不易貼壁細胞的培養;也可用于制備三維膠原凝膠,使細胞在模擬的三維環境中生長。制備鼠尾膠原:將尾腱置于平皿內剪碎,轉移至三角燒瓶中。金華濟南鼠尾膠原
實驗應用:鼠尾膠原在原代培養耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果:自制的鼠尾膠原能正常地培養出大鼠耳蝸邊緣細胞,細胞角蛋白18表達陽性,免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,并且制作簡便,成本低廉。開封鼠尾膠原銷售廠家在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。
鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原代培養中的應用:在國外的藥理,毒理和皮膚病學的研究領域中已得到 的限翩,否則培養成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養層,提高了培養細胞的 材料和方法r1]實驗材料:培養液DEIdE(G皿}ao),表皮細胞生長因子(EGF Sigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰 蛋白酶,]~DTA,細胞培養皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細胞的分離和細胞 懸液的制備:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下 皮膚后.以 消化12h.輕刷表皮面,收集細胞懸液,加入細胞培養液. 用梯度離心收集細胞,以3xi0/m]濃度接種平 皿.(3)鼠尾膠原 凝膠體的制備:具體方法參見文獻c13o(4)培養皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴 入~35mm培養皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中 30rain,散盡剩余氨氣。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。
鼠尾膠原實驗應用:鼠尾膠原在原代培養耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果:自制的鼠尾膠原能正常地培養出大鼠耳蝸邊緣細胞,細胞角蛋白18表達陽性,免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,并且制作簡便,成本低廉。注意事項:在室溫下pH 中性時可迅速成膠,在操作過程中要 盡量保持低溫。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備 鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上, pH 左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度 1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中,在成膠過程中需要加入 0.06體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。 需要的溶液 (均需要無菌、 預冷) 10mg/L 酚紅用于pH 指示) 0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一 般不用),雙蒸水 200ul鼠尾膠原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到膠原溶液中, 會由于 NaOH 不能迅速混勻而產生局部的 膠原凝結) 立即混勻。再加入 100ul 10PBS 10培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后 pH 左右,如果PBS 或培養液中沒有加 酚紅,初次使用時需要用 pH 試紙測試)。堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。天津正規鼠尾膠原直銷廠家
一種基于鼠尾膠原蛋白:根據權利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料。金華濟南鼠尾膠原
一種基于鼠尾膠原蛋白:1.一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,為鼠尾膠原蛋白、聚乙烯醇、殼聚糖、水制成的凍干止血材料,各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為 1-10% 0. 2-5% 0.2-2%,余量為水。2.根據權利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,其特征在于凍干止血材料中,各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為5% 2% 1%,余量的水。3.根據權利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級大鼠鼠尾。金華濟南鼠尾膠原
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