細胞凍存，我們應該注意哪些事項：1、液氮內的細胞凍存較長時間不要超過半年，凍存在液氮中的細胞應一段時間內進行更替。一個細胞系在培養一個月后，可復蘇一管新的細胞確保其質量沒有發生太大變化，傳代幾次后，再凍存留種。2、細胞復蘇時，為保證獲得較高的存活率和接種率，應盡可能的快速完成復蘇，以避免在升溫過程中細胞內部晶體的產生。書面介紹的復蘇溫度是37℃-42℃，但是本人在實際操作中發現40℃環境下復蘇效果較好。3.復蘇時使用的培養基和凍存時使用的培養基中的血清盡量保證同一批次。無血清凍存液注意事項：凍存液中含DMSO成分，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套。上海唐山無血清細胞凍存液

細胞凍存秘籍：1.在倒置相差顯微鏡上每隔幾分鐘檢查酶處理的進展情況。一旦細胞變圓，輕輕敲擊細胞瓶使其脫離塑料表面。加入5mL含血清的生長培養基滅活胰酶?？赡苄枰獎×业囊埔翰僮鱽硎古囵B容器底部的剩余細胞脫落，或將細胞團塊分解成單細胞懸浮液。胰酶的去除或失活對于冷凍細胞至關重要。如果游離試劑不能直接滅活，可以通過下一步的離心去除。2.用15ml離心管收集細胞。取出樣本進行細胞計數，剩余的細胞懸液以約100×g離心5分鐘以獲得細胞沉淀。離心時，用細胞計數板對細胞進行計數。使用臺盼藍染液檢查細胞的活性。上海唐山無血清細胞凍存液無血清快速細胞凍存液：含動物來源的血清成分，能夠有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。

無血清快速細胞凍存液，通用于各種動物細胞株。特別配方具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養細胞的凍存，也適用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞的凍存。產品特色：1.高安全性，完全使用醫藥品等級原料進行生產，不含動物成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產品之間有更高的產品質量一致性。2.細胞存活率高，無批次差異。3.完全凍存液配方，可直接使用，方便簡捷，可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程（省時、省力、省錢）。

細胞凍存注意事項：1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存，但為對數生長期細胞。在凍存前一日換一次培養液;2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍壞;3、凍存和復蘇用新配制的培養液。4、取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項特別重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致炸列。凍存液產品針對細胞凍存的特殊配方，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇率和活力。無血清細胞凍存液使用方法：緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。

細胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；2.取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；4.離心1000rpm，5min；5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml；6.將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；7.在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；8.凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產品介紹

無血清細胞凍存液的優勢：可培養板整板凍存，例如雜交瘤細胞凍存時可節省篩選過程。上海唐山無血清細胞凍存液

使用方法：1)細胞超凈臺無菌環境，1.5mlEP管內加入細胞混懸劑均勻混懸細胞，細胞終濃度為5×106個/ml，混懸液體積為200μl。細胞凍存劑冰水混合物中預冷，逐滴加入細胞凍存劑800μl，細胞混懸劑與細胞凍存劑的體積比控制在1:4。2)開啟程序性降溫，降溫速率為1℃/min，較后降溫至-80℃以下進行凍存。將比較例1凍存后細胞的復蘇率與實施例5凍存后細胞的復蘇率進行對比，具體結果如附圖1所示，可見采用本發明的凍存方法能夠明顯提高細胞的復蘇率。其他實施例通過與比較例1進行比較，也得到相同的試驗結果。本發明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細胞復蘇率，同時還可減少不同批次細胞凍存復蘇率不穩定、以及避免由血清中的支原體，細菌，朊細菌及其他細菌顆粒引發的污染。上海唐山無血清細胞凍存液