無血清細胞凍存液:產品優勢:1.化學成分明確,無任何外源蛋白和血清,適用于各類動物細胞株凍存。2.無需程序降溫,細胞復蘇率90%以上。3.凍存細胞可直接存放于-80℃冰箱,穩定保存數年。4.即用型產品,4℃可穩定保存。細胞凍存:1.收集融合率>90%的對數期的貼壁細胞或者懸浮細胞于離心管中。2.1000rmp離心5分鐘,去除離心管中的上清液,收集細胞沉淀。3.加入適量細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度為1x106~1x107cells/mL。頭輕柔吹打混勻,Z成細胞懸液。4.將離心管中的細胞懸液分裝與細胞凍存管中,每管1mL或1.5mL。5.將分裝好的細胞直接凍存于-80℃冰箱中,可穩定凍存數年。6.如若長期保存,可在次日轉移至液氮中。無血清細胞凍存液產品性能:提高細胞存活率和活力,亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。長沙無血清細胞凍存液廠家批發價
細胞凍存,我們應該注意哪些事項:1、凍存細胞是為了留種,所以要選擇高濃度的細胞量進行凍存。正常情況下,當細胞濃度達到1*105/ml時即可凍存,具體是多少量主要根據個人觀察。2、二甲基亞砜(DMSO)因為穿透細胞的能力較強,因此作為常用的凍存劑,也可以叫做細胞保護劑加入到細胞懸液中。網上有些分享說道,如果選用DMSO,整個細胞懸液的制作過程都要在4℃環境下進行。本人采用過這種方法凍存過A549和某一原代細胞,發現A549復蘇存活率和正常凍存的過程相比并沒有明顯區別,而原代細胞的接種率確實有所上升,可能是因為是A549細胞比較皮實,這種方法更適用于比較脆弱的細胞吧。長沙無血清細胞凍存液廠家批發價無血清細胞凍存液產品性能:用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,無動物源組分。
細胞凍存注意事項:1、細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15m培養液,而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。3、加培養基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度,從如果你加培養基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度。
無血清快速細胞凍存液凍存細胞復蘇方法:1、從冰箱里取出細胞冷凍保存管,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2、待凍存管中細胞混合液完全融化后,立即加入1ml細胞培養基于該冷凍管中與細胞混合,再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養基的試管中,混合均勻。3、離心收集培養細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min),移去上清液。4、清洗細胞,充分洗凈殘留凍存液。5、加入適量的新鮮細胞培養基,使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后,將細胞混合液移至事先準備好的培養瓶中。6、鏡檢后,研究者可根據各自方法和需要來進行細胞培養。含血清,細胞污染(細菌、霉菌和支原體等)的風險更高。
細胞凍存和復蘇的原則:慢凍速融,這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑,會導致細胞內冰晶的產生,從而使細胞產生內源性的機械損傷,引起細胞內環境滲透壓,PH,電解質等的改變,進而促使細胞死亡。細胞凍存液除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細胞培養液.細胞培養的傳代及日常維持過程中,在培養器具、培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費,而且細胞一旦開始原代培養,它的各種生物特性都將逐漸發生變化并隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細胞儲存在液氮中,溫度達-196℃,理論上儲存時間是無限的。無血清細胞凍存液存儲條件:儲存于4℃以下,質量保障期從產品的生產日期起,為期兩年。金華北京無血清細胞凍存液
無血清凍存液注意事項:本產品凍存細胞可以在-80°C冰箱保存3年以上。長沙無血清細胞凍存液廠家批發價
使用方法:1)細胞超凈臺無菌環境,1.5mlEP管內加入細胞混懸劑均勻混懸細胞,細胞終濃度為5×106個/ml,混懸液體積為200μl。細胞凍存劑冰水混合物中預冷,逐滴加入細胞凍存劑800μl,細胞混懸劑與細胞凍存劑的體積比控制在1:4。2)開啟程序性降溫,降溫速率為1℃/min,較后降溫至-80℃以下進行凍存。將比較例1凍存后細胞的復蘇率與實施例5凍存后細胞的復蘇率進行對比,具體結果如附圖1所示,可見采用本發明的凍存方法能夠明顯提高細胞的復蘇率。其他實施例通過與比較例1進行比較,也得到相同的試驗結果。本發明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細胞復蘇率,同時還可減少不同批次細胞凍存復蘇率不穩定、以及避免由血清中的支原體,細菌,朊細菌及其他細菌顆粒引發的污染。長沙無血清細胞凍存液廠家批發價