外泌體的提取方法，先用含無外泌體血清的培養基對人脂肪來源間充質干細胞進行饑餓培養，這樣可使干細胞處于正常生長狀態，不會被克制生長增殖，其所分泌的外泌體所包含的有效物質也更貼近其自然狀態下的外泌體，然后將含有外泌體的培養上清液進行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細胞及其碎片，用100kd超濾管對低速差速離心后的離心液進行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液，將超濾液經過第三離心處理去除雜質后直接用0.22μm過濾器過濾除菌，過濾掉粒徑為220nm以上的物質，進一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液，因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮，這樣過濾除菌效率得到較大提高，較后將濃縮液進行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。該外泌體的提取方法，既結合了差速離心，又結合了超濾和超速離心，通過該提取流程，較終可高效地從人脂肪來源間充質干細培養上清液中提取到高濃度、高純度的外泌體，具有操作簡單、成本低，適合產業化生產的特點。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。溫州正規外泌體提取試劑供應商

外泌體鑒定：外泌體分離之后，需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物，多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察，即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測：外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；細胞質蛋白，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結合蛋白（Annexins）；使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后。南昌外泌體提取試劑來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。

1983年，外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發現，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態、雙層膜結構，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養基等生物體液中。包括瘤細胞在內幾乎所有類型的細胞（免疫細胞、神經細胞、干細胞)，都可以產生并釋放exosome。Exosome內含有與細胞來源相關的蛋白質rRNA和microRNA，Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞，也可運輸蛋白質、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答、炎癥反應、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發揮關鍵作用，不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同，可作為多種疾病的早期診斷標記物，也能作為靶向藥物的載體進行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子，它可以通過外泌體從一個地方轉運到另外一個地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達變化，可以發現外泌體中miRNA特異性功能。直接把外泌體從尿液中沉降下來，無須分離培養人尿液來源細胞并收集培養基。

在無菌條件下提取人體體液，并用PBS緩沖液進行稀釋，然后通過離心篩選初步去除體液中的細胞成分和細胞碎片，制成體液樣本備用；體液樣本純化：通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾，進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質，靜置10～15分鐘，留取沉淀物備用；外泌體提取：將上述沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮，使外泌體懸浮于液體上層，然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體，置于80℃儲存備用。此提取方法條件復雜，成本高，專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來；根據外泌體表面的特異生物化學特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。使用PBS對膜進行洗脫即得到外泌體濃縮液。杭州正規外泌體提取試劑廠家推薦

超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。溫州正規外泌體提取試劑供應商

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等溫州正規外泌體提取試劑供應商