外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。現已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞、間充質干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。昆明正規外泌體提取試劑單價
外泌體的提取方法,先用含無外泌體血清的培養基對人脂肪來源間充質干細胞進行饑餓培養,這樣可使干細胞處于正常生長狀態,不會被克制生長增殖,其所分泌的外泌體所包含的有效物質也更貼近其自然狀態下的外泌體,然后將含有外泌體的培養上清液進行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細胞及其碎片,用100kd超濾管對低速差速離心后的離心液進行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液,將超濾液經過第三離心處理去除雜質后直接用0.22μm過濾器過濾除菌,過濾掉粒徑為220nm以上的物質,進一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液,因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮,這樣過濾除菌效率得到較大提高,較后將濃縮液進行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。石家莊外泌體提取試劑推薦廠家外泌體提取的方法:過濾。
Exosome,中文名外泌體,是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發現,但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發現這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發現點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發現外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質雙層膜結構,能很好的保護其包被的物質,且能靶向特定細胞或組織,因此是一種很好靶向給藥系統(targeteddeliverysystem)。
外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法。
外泌體提取:1、過濾。超濾膜也可用于分離外泌體。根據外泌體的大小,從蛋白質和其他大分子中分離外泌體。較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑,可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體,也有設計成微柱多孔硅纖毛結構以分離40-100nm外泌體:不過,該方法由于過濾膜的粘附,可能會損失外泌體,并且過濾時的壓力和剪切力,可能會使外泌體變形受損。2、基于聚合物的沉淀技術。基于聚合物的沉淀技術通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合,在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。用這種聚合物沉淀具有許多優點,包括對分離的外泌體影響小、pH中性等。目前大多數快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會同時分離非囊泡污染物(包括脂蛋白)而且,聚合物材料的混雜可能會影響下游分析外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。武漢正規外泌體提取試劑銷售廠家
可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評估近似外泌體大小范圍和濃度。昆明正規外泌體提取試劑單價
外泌體(exosomes)是活細胞經過"內吞-融合-外排"等一系列調控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細胞均能產生外泌體,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細胞產生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細胞間物質和信息轉導中發揮重要作用,研究表明其在干細胞、免疫調控、瘤轉移、血管生成以及生物標志物等領域都發揮著不可替代的作用昆明正規外泌體提取試劑單價
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