細胞轉染那些事兒：1.選擇傳代次數較低并處于對數生長期的細胞進行轉染。對大多數細胞而言，均需要在轉染當天或前現在鋪板，第二天上午進行轉染，48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。2.對于貼壁細胞，一般要求在轉染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉染的效率，且支原體不會像細菌污染那么明顯，因而轉染前可用環丙沙星處理細胞以除去支原體。因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大，實驗必須很小心。珠海細胞高效轉染試劑推薦廠家

如何有效提高細胞轉染實驗效率：1.選擇合適的轉染試劑不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然，較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。2.保持較佳的細胞狀態一般低的細胞代數（<50）能確保基因型不變。較適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到指數生長期的細胞，細胞生長旺盛，較容易轉染。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株，在各實驗室不同培養條件下，其生物學性狀發生不同程度的改變，導致其轉染特性也發生變化。因此，如果發現轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。開封正規細胞高效轉染試劑哪里買代細胞和傳代次數多的細胞都不是較佳選擇。

細胞轉染的常用方法：細菌轉染：原理：對于用脂質體不能實現轉染的細胞，可以采用細菌轉染。可用于蛋白質過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉染細胞、原代細胞的穩定性轉染。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌→采用非細菌法轉染包裝細胞系，擴增并分離得到重組細菌顆粒→純化并滴定細菌液→轉導目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養物中的細菌，并加入新鮮培養基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。

轉染的注意事項：用于蛋白生產的細胞的轉染可以在添加有血清或無血清培養基中進行。但更傾向于使用無血清培養基表達蛋白，因為血清蛋白會干擾下游表達蛋白的純化。無血清培養基一般針對某一特定細胞類型優化并有幾類無血清培養基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養基低得多）。無蛋白培養基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學成分的培養基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應用的一種。在含血清時轉染的細胞可以適應無血清培養基，無蛋白培養基或限定化學成分的培養基。在部分情況下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），對于已適應無血清或無蛋白培養基的細胞，可以使用其培養基進行轉染。其他一些無血清培養基包含克制陰離子脂質體介導轉染的成分，在這些情況下，有必要在諸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培養基中進行培養和轉染。在瞬時轉染質粒中往往都含有一個報告基。

細胞轉染的注意事項：血清A、DNA-陽離子脂質體復合物形成時不能含血清，因為血清會影響復合物的形成。B、一般細胞對無血清培養可以耐受幾個小時沒問題，轉染用的培養液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認為會降低轉染效率，轉染培養基中加入血清需要對條件進行優化。C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營養豐富的無血清培養基，或者在轉染培養基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用**轉染試劑。有條件的話，可以用無血清培養基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細胞而是轉動培養板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會增多瞬時轉染的細胞中，外源基因得以表達但它們并不會整合到細胞的基因組中。石家莊正規細胞高效轉染試劑銷售廠家

由于脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。珠海細胞高效轉染試劑推薦廠家

細胞轉染效率影響因素：1.細胞密度一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率，過低或過高都會影響轉染效果。2.細胞生長狀態這點非常關鍵，很多時候傳代次數太少或者太多都將導致細胞對轉染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉染效率以及轉染穩定性、降低細胞毒性，應盡量使用適度傳代的細胞系，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數的一致性。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉染時所需要的轉染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細胞的轉染實驗珠海細胞高效轉染試劑推薦廠家