微滴),包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸分子(也就是說(shuō)我們所說(shuō)的DNA模板),這是與PCR或qPCR反應(yīng)的區(qū)別,PCR或qPCR只在一個(gè)反應(yīng)體系中進(jìn)行,而數(shù)字PCR在每個(gè)反應(yīng)單元(微滴)中都會(huì)對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增結(jié)束后統(tǒng)計(jì)熒光信號(hào)并分析。數(shù)字PCR檢測(cè)其實(shí)離我們?cè)絹?lái)越近,下面我們以幾個(gè)臨床案例研究來(lái)舉例,展示數(shù)字PCR巨大的臨床應(yīng)用前景。1).個(gè)體化診療通過(guò)檢測(cè)T790M位點(diǎn)突變情況,可以更好地評(píng)估一代TKI藥物的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺(tái)ARMS檢測(cè)技術(shù)的靈敏度有限,沒(méi)有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的檢測(cè)到T790M突變。這個(gè)時(shí)候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了****的檢測(cè)精度,此外,dPCR定量的優(yōu)勢(shì)也能充分發(fā)揮出來(lái)了,可以監(jiān)控突變含量變化,做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。2.)基因表達(dá)分析伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細(xì)胞白血病(CML)患者延長(zhǎng)生存期,但是臨床上發(fā)現(xiàn),伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達(dá)量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對(duì)CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果檢測(cè)下限可以達(dá)到,顯示出dPCR在痕量核酸檢測(cè)方面比qPCR具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)[2]。 PCR的三個(gè)反應(yīng)(變性-退火-延伸)0步驟反復(fù)進(jìn)行,使DNA擴(kuò)增量呈指數(shù)上升。上海國(guó)產(chǎn)PCR儀銷(xiāo)售電話
基因擴(kuò)增儀因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來(lái)越多的分子生物學(xué)研究者青睞。面對(duì)各種不同性能的基因擴(kuò)增儀,又該如何選擇呢?基因擴(kuò)增儀的選購(gòu)誤區(qū)誤區(qū)一:儀器通道越多越好隨著基因擴(kuò)增技術(shù)的成熟運(yùn)用,多重?cái)U(kuò)增越來(lái)越熱鬧,基因擴(kuò)增儀也不能幸免。從單通道基因擴(kuò)增儀發(fā)展到如今各個(gè)廠家都推出4通道、5通道甚至6通道基因擴(kuò)增儀,眼花繚亂的選擇讓人無(wú)所適從,就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)。在使用有些廠家5通道的基因擴(kuò)增儀時(shí),為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX或Referencedye,這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個(gè)檢測(cè)通道。這樣以來(lái),真正能檢測(cè)多重PCR熒光信號(hào)的有效通道只有4個(gè),而且使用校正染料可能會(huì)增加后期的使用成本。考慮多重基因擴(kuò)增儀的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā),多重基因擴(kuò)增儀并非人人適用、人人可用,因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。誤區(qū)二:基因擴(kuò)增儀無(wú)需梯度功能對(duì)于使用染料法的定量PCR反應(yīng),雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計(jì)軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算熔解溫度(Tm值),但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差異會(huì)很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化,對(duì)于特殊片斷。 熒光定量PCR儀銷(xiāo)售電話PCR的特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。
PCR基因擴(kuò)增法在遺傳性疾病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機(jī)體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,其根本變化在于遺傳物質(zhì)。地中海貧血(Thalassemia)是一種遺傳性慢性溶血性貧血病,是世界上常見(jiàn)且發(fā)病比高的一種單基因遺傳病。在兩廣、貴州、四川等地發(fā)病率較高,在廣西等地高達(dá)15%。地中海貧血是由于基因突變?cè)斐芍榈鞍椎牟黄胶猓菇Y(jié)構(gòu)正常的肽鏈合成量減少甚至沒(méi)有合成表現(xiàn)為溶血性貧血。接受累基因種類分為α、β、γ等,其中以α、β地貧為常見(jiàn),危害了大。珠蛋白基因簇位于人6號(hào)染色短臂上,有兩個(gè)重復(fù)基因基因位于α1、α2、兩個(gè)α基因及其旁側(cè)序列有很大的同源性,易出現(xiàn)染色體不等交換,導(dǎo)致α基因缺失-α地貧。α地貧基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同時(shí)缺失及非缺失型地貧。可以應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增α1、α2基因從而檢測(cè)這些基因是否缺失、突變等,從而對(duì)α型地中海貧血作出診斷。β地中海貧血基因缺陷主要表現(xiàn)為基因序列中單一核苷酸的突變,或少數(shù)堿基的缺失、插入,使正常β珠蛋白肽鏈合成減注或缺失。應(yīng)用位點(diǎn)特異性寡核苷探針(Aso)進(jìn)行PCR產(chǎn)物斑點(diǎn)雜交即可對(duì)其作出診斷。
PCR儀的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:1、模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;2、模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;3、引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈",而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍(Plateau)。到達(dá)平臺(tái)期所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。在此同時(shí)認(rèn)識(shí)到蛋白質(zhì)是接受RNA的遺傳信息而合成的。50年代Zamecnik等在形態(tài)學(xué)和分離的亞細(xì)胞組分實(shí)驗(yàn)中已發(fā)現(xiàn)微粒體(microsome)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的部位。 PCR實(shí)驗(yàn)室在儀器設(shè)備等硬件上要滿足開(kāi)展臨床檢驗(yàn)的條件,包括生物安全柜和PCR儀。
非洲豬瘟的影響范圍是非常大的,很多家豬或者野豬都極易受到非洲豬瘟病毒的傳染,再加上對(duì)于非洲豬瘟,我們無(wú)法一勞永逸的解決,養(yǎng)殖戶只能不斷檢測(cè),避免豬瘟的苗頭出現(xiàn),同時(shí)注意養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的消毒工作,可以有效的減少非洲豬瘟傳染的概率。在分子生物學(xué)中,經(jīng)常會(huì)遇到細(xì)胞分裂的處理,這些處理方式利用人工來(lái)做的話,花費(fèi)的時(shí)間往往極多,這就造成不必要的人力、物力浪費(fèi),是非常不合算的,所以我們一般利用基因擴(kuò)增儀器進(jìn)行這方面的處理,在很多實(shí)驗(yàn)室的使用過(guò)程中,取得了良好的成效。利用基因擴(kuò)增儀器既可節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)效率,又能節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本,同時(shí)根據(jù)不同的試驗(yàn)進(jìn)行不同的設(shè)置,基因擴(kuò)增儀器是為滿足當(dāng)今分子生物實(shí)驗(yàn)室的需求所設(shè)計(jì),該儀器可以進(jìn)行任何實(shí)時(shí)PCR檢測(cè),如病原體、突變、SNP的分析和快速篩選、細(xì)胞RNA水平的檢測(cè)和量化等。封閉的反應(yīng)體系,將污染降低到小。該儀器能夠?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行實(shí)時(shí)收集和分析,其高效的數(shù)據(jù)管理能力使用戶迅速生成數(shù)據(jù)和進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。基因擴(kuò)增儀哪種好一般的基因擴(kuò)增儀一次只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度,要想測(cè)試不同的溫度就需要多次運(yùn)行,很難滿足大家的實(shí)際需要,現(xiàn)在的基因擴(kuò)增儀可以設(shè)置一系列不同的溫度條件。 PCR儀的應(yīng)用涉及大部分生命科學(xué)領(lǐng)域:食品檢測(cè),臨床檢驗(yàn),疾病控制,檢驗(yàn)檢疫,科研實(shí)驗(yàn)室,環(huán)境衛(wèi)生等.上海力康熒光定量PCR儀價(jià)格信息
PCR擴(kuò)增儀通常由熱蓋部件、熱循環(huán)部件、傳動(dòng)部件、控制部件和電源部件等部分組成。上海國(guó)產(chǎn)PCR儀銷(xiāo)售電話
完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、加樣器等。實(shí)驗(yàn)室是科學(xué)的搖籃,是科學(xué)研究的基地,科技發(fā)展的源泉,對(duì)科技發(fā)展起著非常重要的作用。PCR實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的操作:(1)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn),經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的工作;(2)在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施;(3)清潔工作及時(shí)、正確。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后,必須立即對(duì)本區(qū)進(jìn)行清潔。除常規(guī)的消毒液體對(duì)表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對(duì)一些實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理。嚴(yán)格規(guī)范管理要求(1)嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室,有條件的情況下要設(shè)置的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門(mén);(2)在各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服(如不同顏色),當(dāng)工作人員離開(kāi)時(shí)不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;(3)盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。(4)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是較主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。上海國(guó)產(chǎn)PCR儀銷(xiāo)售電話
力新儀器(上海)有限公司坐落在青浦區(qū)盈港東路6868號(hào)1幢二層2082室、2086室,是一家專業(yè)的三類:6815注射穿刺器械,6821醫(yī)用電子儀器設(shè)備(不含植入類重點(diǎn)監(jiān)管),6822醫(yī)用光學(xué)器具、儀器及內(nèi)窺鏡設(shè)備(不含植入類重點(diǎn)監(jiān)管),6823醫(yī)用超聲儀器及有關(guān)設(shè)備,6824醫(yī)用激光儀器設(shè)備,6825醫(yī)用高頻儀器設(shè)備,6826物理***及康復(fù)設(shè)備,6828醫(yī)用磁共振設(shè)備,6830醫(yī)用x射線設(shè)備,6832醫(yī)用高能射線設(shè)備,6833醫(yī)用核素設(shè)備,6845體外循環(huán)及血液處理 設(shè)備,6854手術(shù)室、急救室、診療室設(shè)備及器具,6858醫(yī)用冷療、低溫、冷藏設(shè)備及器具,6864醫(yī)用衛(wèi)生材料及敷料,6866醫(yī)用高分子材料及制品(不含重點(diǎn)監(jiān)管),6870軟件,6877介入器材(不含重點(diǎn)監(jiān)管)***公司。公司目前擁有較多的高技術(shù)人才,以不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力,加快企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新,實(shí)現(xiàn)穩(wěn)健生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)。誠(chéng)實(shí)、守信是對(duì)企業(yè)的經(jīng)營(yíng)要求,也是我們做人的基本準(zhǔn)則。公司致力于打造***的數(shù)字化手術(shù)室,實(shí)驗(yàn)室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務(wù),我們相信誠(chéng)實(shí)正直、開(kāi)拓進(jìn)取地為公司發(fā)展做正確的事情,將為公司和個(gè)人帶來(lái)共同的利益和進(jìn)步。經(jīng)過(guò)幾年的發(fā)展,已成為數(shù)字化手術(shù)室,實(shí)驗(yàn)室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品行業(yè)出名企業(yè)。