實時熒光定量pcr儀,由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設(shè)備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常化后可以設(shè)定域值水平,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。實時熒光定量pcr儀組成熒光定量系統(tǒng)和計算機作用,監(jiān)測循環(huán)過程的熒光,數(shù)據(jù)形式顯示,通過開發(fā)的實時分析,軟件以圖表的表現(xiàn)。實時熒光定量pcr儀優(yōu)勢:樣品到達(dá)域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點的循環(huán)數(shù))。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴(kuò)增效率為大,這樣可以獲得準(zhǔn)確,可重復(fù)性的數(shù)據(jù)。如果同時擴(kuò)增的還有標(biāo)有相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,線性回歸分析將產(chǎn)生一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以用來計算未知樣品的濃度。實時熒光定量pcr儀技術(shù)原理:所謂real-timeQ-PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)。 普通PCR儀主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗、檢疫等。高校科研PCR儀批發(fā)價格
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶適反應(yīng)溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR儀實際就是一個溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。PCR擴(kuò)增儀又稱為PCR基因擴(kuò)增儀、PCR核酸擴(kuò)增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增儀,是利用PCR(Polymerasechainreaction,聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)對特定DNA擴(kuò)增的一種儀器設(shè)備,被運用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實驗室中,例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等。 力康熒光定量PCR儀制造廠家PCR也被應(yīng)用于目標(biāo)DNA的片段克隆,該技術(shù)被稱為 PCR 克隆。
完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。實驗室是科學(xué)的搖籃,是科學(xué)研究的基地,科技發(fā)展的源泉,對科技發(fā)展起著非常重要的作用。PCR實驗室規(guī)范的操作:(1)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn),經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗的工作;(2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié)束后,必須立即對本區(qū)進(jìn)行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理。嚴(yán)格規(guī)范管理要求(1)嚴(yán)格控制進(jìn)出實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實驗室,有條件的情況下要設(shè)置的通道和進(jìn)出整個實驗區(qū)的門;(2)在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服(如不同顏色),當(dāng)工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;(3)盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。(4)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是較主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實驗室的地方棄掉。
PCR基因擴(kuò)增法在遺傳性疾病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,其根本變化在于遺傳物質(zhì)。苯西酮尿癥(PKU)是一種常染色體隱性遺傳病,患者因苯丙酸羥化酶轉(zhuǎn)化為酷氨酸,使苯氨酸及其代謝物在體內(nèi)大量蓄積,出現(xiàn)腦組損傷及不可逆性智力發(fā)育障礙。PKU患者出生時正常,新生兒一經(jīng)確診為PKU停止母乳喂養(yǎng)采用低苯丙氨酸欽食療法8—10年,可使患者智力水平發(fā)展維持正常。由于低苯丙氨酸欽食非常昂貴,一般家庭難以承受,因此,施行產(chǎn)前診斷,防止患兒出生是比較好的選擇。PAH只在肝細(xì)胞中表達(dá),不能用血細(xì)胞,成纖維細(xì)胞、羊水、絨毛細(xì)胞進(jìn)行酶活性分析,只能進(jìn)行基因診斷。PKU的基因變化并非全部PAH基因的缺失,而是以點突變?yōu)橹饕憩F(xiàn)形式,而且其突變位點很多。必須使用PCR擴(kuò)增結(jié)合,ASO,SSCP或使用擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析(AmpFLA)進(jìn)行檢測,這些技術(shù)都較復(fù)雜,檢驗人員須經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)。 熒光定量PCR因操作方便、運行速度快、實驗結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。
PCR實驗室的空氣流向必須嚴(yán)格按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進(jìn)行,防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。風(fēng)速流向不得混亂。為了保證房間內(nèi)的壓差和避免污染,應(yīng)在空調(diào)面板處寫清楚送風(fēng)機和排風(fēng)機的開啟順序和關(guān)閉順序,先后順序不得混亂。空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5帕,潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差應(yīng)大于10帕,應(yīng)配備監(jiān)測靜壓差的設(shè)備,并定期監(jiān)控。一般情況下,試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,造成污染;可以通過控制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達(dá)到正壓效果。核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓,以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品,可以通過控制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達(dá)到負(fù)壓效果。理想情況下,PCR實驗室緩沖間內(nèi),可設(shè)置正壓,使室內(nèi)空氣不流向室外,室外空氣不流向室內(nèi)。PCR實驗室進(jìn)風(fēng)由原有中央空調(diào)控制的要求將中央空調(diào)風(fēng)口安裝到指定定點。臨床診斷、法醫(yī)學(xué)調(diào)查和農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究等領(lǐng)域要求設(shè)備有可靠的性能、靈敏度和標(biāo)準(zhǔn),pcr儀正巧合適。力康國產(chǎn)PCR儀批發(fā)價格
PCR的特點是能將微量的DNA大幅增加。高校科研PCR儀批發(fā)價格
3).無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細(xì)胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達(dá)5%的胎兒死亡率及。而有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細(xì)胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時,可以100%的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當(dāng)厲害了。Nacia數(shù)字PCRNaica數(shù)字PCR系統(tǒng)——簡便、快速地完成3通道檢測Naica數(shù)字PCR系統(tǒng)是法國Stilla公司開發(fā)的下一代核酸定量技術(shù)。使用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片——Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過程的耗材。樣品通過毛細(xì)通道網(wǎng)格以30,000個微滴的形式進(jìn)入2D芯片中,可稱作Crystal微滴。Naica數(shù)字PCR擴(kuò)增實驗在芯片上實現(xiàn)。對微滴成像用以檢測包含擴(kuò)增片段的微滴。一步是對陽性微滴計數(shù)從而得到的核酸數(shù)量。Naica數(shù)字PCR,結(jié)合了強大的圖像分析技術(shù)和直觀可視的檢測功能,從而達(dá)到了數(shù)字PCR定量的置信水平,獲得的數(shù)據(jù)真實可信。 高校科研PCR儀批發(fā)價格
力新儀器(上海)有限公司位于青浦區(qū)盈港東路6868號1幢二層2082室、2086室,交通便利,環(huán)境優(yōu)美,是一家貿(mào)易型企業(yè)。力新儀器是一家外商獨資企業(yè)企業(yè),一直“以人為本,服務(wù)于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽,持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。公司業(yè)務(wù)涵蓋數(shù)字化手術(shù)室,實驗室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品,價格合理,品質(zhì)有保證,深受廣大客戶的歡迎。力新儀器將以真誠的服務(wù)、創(chuàng)新的理念、***的產(chǎn)品,為彼此贏得全新的未來!