PCR（聚合酶鏈式反應）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR儀實際就是一個溫控設備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進行溫度控制。PCR擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀，是利用PCR(Polymerasechainreaction，聚合酶鏈反應)技術對特定DNA擴增的一種儀器設備，被運用于醫學、生物學實驗室中，例如用于判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。 PCR已發展成為分子生物學領域的一項關鍵技術和常規技術,極大地推動了生命科學各個領域的發展。國產品牌PCR儀廠家報價

    談談數字PCR那些事數字PCR即DigitalPCR（dPCR)，它是一種核酸分子定量技術。相較于qPCR，數字PCR可讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的定量。1、PCR之數字PCR技術發展歷程在定量PCR時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是定量呢？如今，你無需糾結了，因為數字PCR（digitalPCR）來了。盡管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域：拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。Nacia數字PCR2、數字PCR之dPCR檢測原理數字PCR即DigitalPCR（dPCR)是這幾年才迅速發展起來的一種核酸定量分析技術，雖然出生的晚，但是潛力不小，因為數字PCR解決了qPCR這么多年懸而未決的問題，那就是不依賴于標準曲線的定量并且可以將檢測靈敏度提高至單個核酸分子。那它是怎么做到的呢？這要從它的檢測原理說起。Nacia數字PCR數字PCR通過將一個樣本分成幾十到幾萬份，分配到不同的反應單元。 國產實時熒光PCR儀規格有哪些PCR儀被大量運用于醫學、生物學實驗室中。

    微滴），包含一個或多個拷貝的核酸分子(也就是說我們所說的DNA模板)，這是與PCR或qPCR反應的區別，PCR或qPCR只在一個反應體系中進行，而數字PCR在每個反應單元（微滴）中都會對目標分子進行擴增，擴增結束后統計熒光信號并分析。數字PCR檢測其實離我們越來越近，下面我們以幾個臨床案例研究來舉例，展示數字PCR巨大的臨床應用前景。1）.個體化診療通過檢測T790M位點突變情況，可以更好地評估一代TKI藥物的療效及耐藥情況并指導第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平臺ARMS檢測技術的靈敏度有限，沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技術展現出了****的檢測精度，此外，dPCR定量的優勢也能充分發揮出來了，可以監控突變含量變化，做到及早發現耐藥。2.）基因表達分析伊馬替尼（Imatinib）可以有效幫助很多慢性髓細胞白血病（CML）患者延長生存期，但是臨床上發現，伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉錄產物表達量有很大的關系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉錄產物進行測定，結果檢測下限可以達到，顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優勢[2]。

    目前，采用熒光定量PCR檢測技術可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優點。如：結核菌基因診斷的意義主要表現在：a.區分TB與其它分枝桿菌；b.檢測TB耐藥基因；c.提高TB的陽性檢出率。⑵產前診斷到目前為止，人們對遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病還無法，只能通過產前監測，減少病嬰出生，以防止各類遺傳性疾病的發生，如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區基因是一種無創傷性的方法，易為孕婦所接受。⑶藥物療效考核對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析顯示：病毒量與某些藥物的療效關系。HCV高水平表達，干擾素作用不敏感，而HCV低滴度，干擾素作用敏感；在拉米夫定過程中，HBV-DNA的血清含量曾有下降，隨后若再度上升或超出以前水平，則提示病毒發生變異。如PCR技術在HBV檢測中的應用及意義：a.了解乙肝病毒在體內存在的數量。b.是否復制。c.是否傳染，傳染性有多強。d.是否有必要服藥。 實時熒光定量PCR儀主要應用于臨床醫學檢測、生物醫藥研發、食品行業、科研院校等。

    1．一般性原則(1)長度：一般引物互補區的長度為16-25bp，引物互補區的4×(G十C)十2×(A十T)不要沒有必要大于70，一般也不要低于50(2)G十c含量：好在45％一55％之間，但有時受模板限制，無法理想化。但在有幾種選擇時，可以把G十c含量接近50%作為參數之一(3)堿基分布的隨機性：應避免連續出現4個以上的單一堿基。尤其是不應在其3’端出現超過3個的連續G或C，否則會使引物在G十C富集序列區錯誤引發。(4)引物自身：不能含有很長的牢固的自身互補序列，尤其是引物3‘端回折形成的發夾不要一般超過3堿基，否則會影響引物與模板的結合(5)引物之間：兩個引物之間不應有很長的牢固的互補或同源堿基，尤應避免3’端的互補重疊。2.具體原則①引物長度；特異性一般通過引物長度和退火溫度控制。如果PCR的退火溫度設置在近于引物Tm值（引物/模板雙鏈體的解鏈溫度）幾度的范圍內，18到24個堿基的寡核苷酸鏈是有很好的序列特異性的。引物越長，擴增退火時被引發的模板越少。為優化PCR反應，使用確保溶解溫度不低于54℃的短的引物，可獲得好的效率和特異性。總的來說，好在特異性允許的范圍內尋求安全性。每增加一個核苷酸，引物特異性提高4倍；這樣，大多數應用的短引物長度為18個核苷酸。 PCR克隆的一大優點是能夠通過克隆將所需突變引入目的基因中，以便進行突變研究。核酸定量PCR儀批發價格

由于PCR簡便易行、靈敏度高等有點，該技術被應用于多數分子實驗的研究中。國產品牌PCR儀廠家報價

    基本的PCR須具備:1.要被復制的DNA模板2.界定復制范圍兩端的引物（四種脫氧核苷酸）及水。利用升溫使DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈，進而達到基因復制的目的。PCR的設想核酸研究已有100多年的歷史，二十世紀60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術，Korana于1971年提出核酸體外擴增的設想：“經過DNA變性，與合適的引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，并不斷重復該過程便可克隆tRNA基因”。1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。其原理類似于DNA的體內復制。Mullis使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段，其缺點是：①Klenow酶不耐高溫，90℃會變性失活，每次循環都要重新加。②引物鏈延伸反應在37℃下進行，容易發生模板和引物之間的堿基錯配，其PCR產物特異性較差，合成的DN段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術雖較傳統的基因擴增具備許多突出的優點，但由于Klenow酶不耐熱，在DNA模板進行熱變性時，會導致此酶鈍化，每加入一次酶只能完成一個擴增反應周期，給PCR技術操作程序添了不少困難。這使得PCR技術在一段時間內沒能引起生物醫學界的足夠重視。 國產品牌PCR儀廠家報價

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