而引物3’末端后5到6個核苷酸的錯配應盡可能的少。如果3’末端的錯配過多,通過降低反應的退火溫度來補償這種錯配不會有什么效果,反應幾乎注定要失敗。引物3’末端的另一個問題是防止一對引物內的同源性。應特別注意引物不能互補,尤其是在3’末端。引物間的互補將導致不想要的引物雙鏈體的出現,這樣獲得的PCR產物其實是引物自身的擴增。這將會在引物雙鏈體產物和天然模板之間產生競爭PCR狀態,從而影響擴增成功。引物3’末端的穩定性由引物3’末端的堿基組成決定,一般考慮末端5個堿基的ΔG。此值的大小對擴增有較大的影響,負值大,則3’末端穩定性高,擴增效率更高,同時也更易于異位引發。需要注意的是,引物3’末端應盡量避免T。實驗證明,以T結尾的引物即使與T,G或C錯配仍可有效延伸。⑥PCR產物的長度及在耙序列內的位置所有的計算機程序都提供對PCR產物長度范圍的選擇。一般說來,PCR產物長度對擴增效率有影響。特定的應用情況下,PCR產物長度部分取決于模板材料。預期產物的特定長度經常取決于應用的需要。若目的是建立測定特異DN段的臨床檢驗方法,120~300bp的小DNA擴增產物可能是好的。產物應具有好的特異性和高的產生效率。 PCR儀是分子生物學相關實驗的常規儀器。梯度PCR儀銷售價格
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。實驗室是科學的搖籃,是科學研究的基地,科技發展的源泉,對科技發展起著非常重要的作用。PCR實驗室規范的操作:(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作;(2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結束后,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。嚴格規范管理要求(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置的通道和進出整個實驗區的門;(2)在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域;(3)盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。(4)擴增產物分析區是較主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉。上海力康高校科研PCR儀哪個牌子好PCR技術是支撐現代分子生物學發展的一塊重要基石。
熒光定量PCR儀因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的現今,難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳資料。面對各種不同性能的產品,您又該如何選擇呢?首先建議大家走出認識熒光定量PCR的兩個誤區:誤區一:儀器通道越多越好隨著PCR技術的成熟運用,多重擴增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時,為了確保實驗結果的精確性和準確性都要在實驗中使用ROX(一種熒光染料)或Referencedye,這些熒光染料都必須單獨使用一個檢測通道。這樣以來,真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個,而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。考慮多重熒光定量PCR的通道數的時候也應該從實驗室實際情況出發,多重PCR并非人人適用、人人可用,因為它使實驗復雜化了。誤區二:real-timePCR儀無需梯度功能對于使用染料法的定量PCR反應,雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經驗公式計算熔解溫度(Tm值),但運用的公式不同、引物序列不同。
PCR基因擴增法在遺傳性疾病產前診斷中的應用,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,其根本變化在于遺傳物質。地中海貧血(Thalassemia)是一種遺傳性慢性溶血性貧血病,是世界上常見且發病比高的一種單基因遺傳病。在兩廣、貴州、四川等地發病率較高,在廣西等地高達15%。地中海貧血是由于基因突變造成珠蛋白的不平衡,使結構正常的肽鏈合成量減少甚至沒有合成表現為溶血性貧血。接受累基因種類分為α、β、γ等,其中以α、β地貧為常見,危害了大。珠蛋白基因簇位于人6號染色短臂上,有兩個重復基因基因位于α1、α2、兩個α基因及其旁側序列有很大的同源性,易出現染色體不等交換,導致α基因缺失-α地貧。α地貧基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同時缺失及非缺失型地貧。可以應用PCR技術擴增α1、α2基因從而檢測這些基因是否缺失、突變等,從而對α型地中海貧血作出診斷。β地中海貧血基因缺陷主要表現為基因序列中單一核苷酸的突變,或少數堿基的缺失、插入,使正常β珠蛋白肽鏈合成減注或缺失。應用位點特異性寡核苷探針(Aso)進行PCR產物斑點雜交即可對其作出診斷。 PCR反應的特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性。
力康熒光定量pcr儀X960型數據分析系統:向導式的全中文操作界面,直觀、清晰、功能 -實時記錄熒光信號的原始數據;涵蓋多種分析模式:相對/ 定量、標準溶解曲線、終點法等位基因鑒定、高分辨率溶解曲線、等溫擴增等;內置統計分析工具和自定義公式編輯工具,數據無需導出,直接在儀器軟件中分析完成。力康熒光定量pcr儀X960型其他人性化設計:具有梯度、Touchdown等高級編程功能、WIFI或LAN連接PC端-可實現一臺PC機連接多臺qPCR;低噪音、低能耗、長壽命。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物.梯度PCR儀銷售價格
PCR的三個反應(變性-退火-延伸)0步驟反復進行,使DNA擴增量呈指數上升。梯度PCR儀銷售價格
原位PCR儀:用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀稱作原位PCR儀。如病源基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等。是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在位置上進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,又能標出靶序列在細胞內的位置,對于在分子和細胞水平上研究疾病的發病機理和臨床過程及病理的轉變有重大的實用價值。主要應用于臨床、科研。原位PCR儀,主要應用于:檢測外源性基因片段,提高檢出率,集中在病毒的檢查上,如HIV、HPV、HBV、CMV等;觀察病原體在體內分布規律;內源性基因片段,如人體的單基因病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRN段、基因片段等;檢測導入基因;遺傳病基因檢測如β-地中海貧血。實時熒光定量PCR儀:在普通PCR儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統的PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同,只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統得出量化的實時結果輸出。把這種PCR儀叫做實時熒光定量PCR儀。梯度PCR儀銷售價格
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