完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。實驗室是科學的搖籃,是科學研究的基地,科技發展的源泉,對科技發展起著非常重要的作用。PCR實驗室規范的操作:(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作;(2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結束后,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。嚴格規范管理要求(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置的通道和進出整個實驗區的門;(2)在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域;(3)盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。(4)擴增產物分析區是較主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉。在醫學檢驗學中,pcr儀對傳染疾病的診斷意義尤為重要。力康梯度PCR儀銷售電話
1993年,美國科學家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學獎,他所取得的成就是發明了PCR技術。PCR,中文譯為聚合酶鏈式反應,其實是一種DNA的快速擴增技術,其擴增效率之高就象核裂變的“鏈式反應”那樣。PCR技術通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用,可以在3個小時內把特定的DNA量提高1000萬倍。這種技術一問世,立刻引起了分子生物學研究的一場**,人們利用這種轟動全世界的技術很快就把微觀領域的生物學研究地往前推了一步。可以這么說,PCR技術使分子生物學研究一下子獲得了突破,而且隨著PCR技術的日趨完善,PCR在人類社會生活中的應用也越來越。比如說在“DNA指紋”中我們提到,科學家們只需要一根頭發甚至一個細胞就可以完成DNA指紋的鑒定工作,這里實際上就要采用PCR技術,因為一個細胞中的DNA含量實在太少了,人們根本不可能檢測到它的指紋;有了PCR技術就好辦了,通過PCR技術把這個細胞中的DN斷擴增1000萬倍,這樣DNA量就足夠作指紋鑒定了。再比如,在醫院里檢驗血液中的某種病毒,有時病毒量極少(例如病毒攜帶者),通過傳統的檢查方法費力又費時,這時PCR技術也許就可以幫上忙。可以先選定這種病毒DNA上的一段DNA,設計合適的引物DNA。 國產實時定量PCR儀銷售價格PCR擴增儀通常由熱蓋部件、熱循環部件、傳動部件、控制部件和電源部件等部分組成。
力康熒光定量pcr儀X960型數據分析系統:向導式的全中文操作界面,直觀、清晰、功能 -實時記錄熒光信號的原始數據;涵蓋多種分析模式:相對/ 定量、標準溶解曲線、終點法等位基因鑒定、高分辨率溶解曲線、等溫擴增等;內置統計分析工具和自定義公式編輯工具,數據無需導出,直接在儀器軟件中分析完成。力康熒光定量pcr儀X960型其他人性化設計:具有梯度、Touchdown等高級編程功能、WIFI或LAN連接PC端-可實現一臺PC機連接多臺qPCR;低噪音、低能耗、長壽命。
PCR儀的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:1、模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;2、模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;3、引物的延伸:DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈",而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍(Plateau)。到達平臺期所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。在此同時認識到蛋白質是接受RNA的遺傳信息而合成的。50年代Zamecnik等在形態學和分離的亞細胞組分實驗中已發現微粒體(microsome)是細胞內蛋白質合成的部位。 PCR技術不僅可用于基礎研究,還適用于日常的臨床診斷、法醫學調查和農業生物技術研究。
基本的PCR須具備:1.要被復制的DNA模板2.界定復制范圍兩端的引物(四種脫氧核苷酸)及水。利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制的目的。PCR的設想核酸研究已有100多年的歷史,二十世紀60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術,Korana于1971年提出核酸體外擴增的設想:“經過DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復該過程便可克隆tRNA基因”。1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。其原理類似于DNA的體內復制。Mullis使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺點是:①Klenow酶不耐高溫,90℃會變性失活,每次循環都要重新加。②引物鏈延伸反應在37℃下進行,容易發生模板和引物之間的堿基錯配,其PCR產物特異性較差,合成的DN段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術雖較傳統的基因擴增具備許多突出的優點,但由于Klenow酶不耐熱,在DNA模板進行熱變性時,會導致此酶鈍化,每加入一次酶只能完成一個擴增反應周期,給PCR技術操作程序添了不少困難。這使得PCR技術在一段時間內沒能引起生物醫學界的足夠重視。 實時熒光定量PCR儀主要應用于臨床醫學檢測、生物醫藥研發、食品行業、科研院校等。力康梯度PCR儀銷售電話
PCR反應的特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性。力康梯度PCR儀銷售電話
PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR儀實際就是一個溫控設備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制。PCR擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀,是利用PCR(Polymerasechainreaction,聚合酶鏈反應)技術對特定DNA擴增的一種儀器設備,被運用于醫學、生物學實驗室中,例如用于判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。 力康梯度PCR儀銷售電話
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