PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn),是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA的片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握生物體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級(jí)別。PCR實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的條件1、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實(shí)驗(yàn)室實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)AppliedBiosystems公司推出,由于該技術(shù)不實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前已得到廣泛應(yīng)用。2、檢測(cè)設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實(shí)驗(yàn)室設(shè)置要求熒光定量PCR儀+實(shí)時(shí)熒光定量試劑+通用電腦+自動(dòng)分析軟件,構(gòu)成PCR-DNA/RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)。3、必須通過(guò)國(guó)家臨床檢驗(yàn)中心的驗(yàn)收和認(rèn)證;4、檢測(cè)人員必須通過(guò)國(guó)家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并取得合格證書。PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)工作人員必須參加由國(guó)家衛(wèi)生部或各省臨床檢驗(yàn)中心舉辦的臨床基因擴(kuò)增培訓(xùn)班,并持證上崗。PCR實(shí)驗(yàn)室通過(guò)驗(yàn)收,實(shí)驗(yàn)室至少必須應(yīng)有兩個(gè)以上持有“臨床基因檢測(cè)上崗證”。PCR實(shí)驗(yàn)室必須建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理制度、建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序(SOP)、建立系列質(zhì)量管理文件等。確保實(shí)驗(yàn)室日常運(yùn)行符合國(guó)家衛(wèi)生部的要求,確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、確保實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生安全。PCR反應(yīng)的特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性。上海PCR儀價(jià)格比較
選擇該物種使用頻率高的密碼子,以降低引物的簡(jiǎn)并性。③應(yīng)努力避免3’末端的簡(jiǎn)并,對(duì)于大多數(shù)氨基酸殘基來(lái)說(shuō),意味著引物3’末端不要位于密碼子的第三位。④在一些多義位置使用脫氧次黃嘌呤(dI)代替簡(jiǎn)并堿基。4.測(cè)序引物設(shè)計(jì)當(dāng)然,測(cè)序引物的設(shè)計(jì)一般都由測(cè)序公司來(lái)完成,如果需要自己設(shè)計(jì)的話;那么除了按照上面所提到的引物設(shè)計(jì)通用標(biāo)準(zhǔn)外,還需要注意兩點(diǎn):①測(cè)序引物的特異性的標(biāo)準(zhǔn)掌握應(yīng)該更嚴(yán)格一些,也就是說(shuō)設(shè)計(jì)時(shí)更優(yōu)先考慮特異性。因?yàn)樵跍y(cè)序反應(yīng)中,如果引物與模板在非預(yù)期位置退火并引發(fā)鏈延伸,會(huì)對(duì)結(jié)果對(duì)來(lái)很大的干擾甚至造成結(jié)果無(wú)法識(shí)讀。②測(cè)序引物的Tm值適當(dāng)高一些。現(xiàn)在大部分測(cè)序反應(yīng)均選用耐熱的測(cè)序級(jí)DNA聚合酶來(lái)催化,并采用PCR的熱循環(huán)程序。選用的測(cè)序引物的Tm值稍高一些,有助于使反應(yīng)順利跨過(guò)待測(cè)模板的二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū),也有助于降低非特異反應(yīng)。5.探針的設(shè)計(jì)探針的設(shè)計(jì),根據(jù)不同的用途各有其設(shè)計(jì)特點(diǎn),這里只是就通用的原則進(jìn)行討論:①探針的長(zhǎng)短一般在20-50核苷酸之間,過(guò)長(zhǎng)合成成本高,且易出現(xiàn)聚合酶合成錯(cuò)誤,雜交時(shí)間長(zhǎng)。太短則特異性下降。②注意G和C的含量努力控制在40-60%,同時(shí)一種堿基連續(xù)重復(fù)不超過(guò)4個(gè),以免非特異性雜交產(chǎn)生。 核酸定量PCR儀批發(fā)價(jià)而核酸檢測(cè)方法中,PCR儀無(wú)疑是本次臨床檢測(cè)的關(guān)鍵利器。
在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)的PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。把這種PCR儀叫做實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(qPCR儀)。熒光定量PCR儀有單通道、雙通道和多通道。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候,選用單通道,有多熒光標(biāo)記的時(shí)候用多通道。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物,因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量,需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同目的基因片段的量。主要用于醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè)、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等機(jī)構(gòu)。根據(jù)DNA擴(kuò)增時(shí)升溫介質(zhì)的不同可以將PCR儀分為:變溫鋁塊式PCR儀、水浴式PCR儀和變溫式流式PCR儀。1.變溫鋁塊式PCR儀熱源用電阻絲、導(dǎo)電熱膜、熱泵式珀?duì)柼雽?dǎo)體元件制作,讓帶有凹孔的鋁塊升溫,用自來(lái)水、制冷壓縮機(jī)或半導(dǎo)體降溫。優(yōu)點(diǎn):溫度傳導(dǎo)快,各管的擴(kuò)增一致性好;反應(yīng)管規(guī)格一致時(shí)無(wú)須外涂石蠟油;可用微電腦調(diào)節(jié)溫度轉(zhuǎn)換。
1.一般性原則(1)長(zhǎng)度:一般引物互補(bǔ)區(qū)的長(zhǎng)度為16-25bp,引物互補(bǔ)區(qū)的4×(G十C)十2×(A十T)不要沒有必要大于70,一般也不要低于50(2)G十c含量:好在45%一55%之間,但有時(shí)受模板限制,無(wú)法理想化。但在有幾種選擇時(shí),可以把G十c含量接近50%作為參數(shù)之一(3)堿基分布的隨機(jī)性:應(yīng)避免連續(xù)出現(xiàn)4個(gè)以上的單一堿基。尤其是不應(yīng)在其3’端出現(xiàn)超過(guò)3個(gè)的連續(xù)G或C,否則會(huì)使引物在G十C富集序列區(qū)錯(cuò)誤引發(fā)。(4)引物自身:不能含有很長(zhǎng)的牢固的自身互補(bǔ)序列,尤其是引物3‘端回折形成的發(fā)夾不要一般超過(guò)3堿基,否則會(huì)影響引物與模板的結(jié)合(5)引物之間:兩個(gè)引物之間不應(yīng)有很長(zhǎng)的牢固的互補(bǔ)或同源堿基,尤應(yīng)避免3’端的互補(bǔ)重疊。2.具體原則①引物長(zhǎng)度;特異性一般通過(guò)引物長(zhǎng)度和退火溫度控制。如果PCR的退火溫度設(shè)置在近于引物Tm值(引物/模板雙鏈體的解鏈溫度)幾度的范圍內(nèi),18到24個(gè)堿基的寡核苷酸鏈?zhǔn)怯泻芎玫男蛄刑禺愋缘摹R镌介L(zhǎng),擴(kuò)增退火時(shí)被引發(fā)的模板越少。為優(yōu)化PCR反應(yīng),使用確保溶解溫度不低于54℃的短的引物,可獲得好的效率和特異性。總的來(lái)說(shuō),好在特異性允許的范圍內(nèi)尋求安全性。每增加一個(gè)核苷酸,引物特異性提高4倍;這樣,大多數(shù)應(yīng)用的短引物長(zhǎng)度為18個(gè)核苷酸。 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。
實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備:1、試劑準(zhǔn)備區(qū):主要進(jìn)行試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過(guò)其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機(jī)、加樣器、振蕩器等。對(duì)于氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。2、樣品制備區(qū):主要進(jìn)行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。3、擴(kuò)增區(qū):主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外,已制備的DNA模板(來(lái)自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有:擴(kuò)增儀、冰箱、離心機(jī)、加樣器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。由于PCR簡(jiǎn)便易行、靈敏度高等有點(diǎn),該技術(shù)被應(yīng)用于多數(shù)分子實(shí)驗(yàn)的研究中。上海國(guó)產(chǎn)品牌PCR儀廠家直銷價(jià)
梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。上海PCR儀價(jià)格比較
非洲豬瘟的影響范圍是非常大的,很多家豬或者野豬都極易受到非洲豬瘟病毒的傳染,再加上對(duì)于非洲豬瘟,我們無(wú)法一勞永逸的解決,養(yǎng)殖戶只能不斷檢測(cè),避免豬瘟的苗頭出現(xiàn),同時(shí)注意養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的消毒工作,可以有效的減少非洲豬瘟傳染的概率。在分子生物學(xué)中,經(jīng)常會(huì)遇到細(xì)胞分裂的處理,這些處理方式利用人工來(lái)做的話,花費(fèi)的時(shí)間往往極多,這就造成不必要的人力、物力浪費(fèi),是非常不合算的,所以我們一般利用基因擴(kuò)增儀器進(jìn)行這方面的處理,在很多實(shí)驗(yàn)室的使用過(guò)程中,取得了良好的成效。利用基因擴(kuò)增儀器既可節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)效率,又能節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本,同時(shí)根據(jù)不同的試驗(yàn)進(jìn)行不同的設(shè)置,基因擴(kuò)增儀器是為滿足當(dāng)今分子生物實(shí)驗(yàn)室的需求所設(shè)計(jì),該儀器可以進(jìn)行任何實(shí)時(shí)PCR檢測(cè),如病原體、突變、SNP的分析和快速篩選、細(xì)胞RNA水平的檢測(cè)和量化等。封閉的反應(yīng)體系,將污染降低到小。該儀器能夠?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行實(shí)時(shí)收集和分析,其高效的數(shù)據(jù)管理能力使用戶迅速生成數(shù)據(jù)和進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。基因擴(kuò)增儀哪種好一般的基因擴(kuò)增儀一次只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度,要想測(cè)試不同的溫度就需要多次運(yùn)行,很難滿足大家的實(shí)際需要,現(xiàn)在的基因擴(kuò)增儀可以設(shè)置一系列不同的溫度條件。 上海PCR儀價(jià)格比較
力新儀器(上海)有限公司辦公設(shè)施齊全,辦公環(huán)境優(yōu)越,為員工打造良好的辦公環(huán)境。在力新儀器近多年發(fā)展歷史,公司旗下現(xiàn)有品牌力康,Heal Force等。公司以用心服務(wù)為重點(diǎn)價(jià)值,希望通過(guò)我們的專業(yè)水平和不懈努力,將三類:6815注射穿刺器械,6821醫(yī)用電子儀器設(shè)備(不含植入類重點(diǎn)監(jiān)管),6822醫(yī)用光學(xué)器具、儀器及內(nèi)窺鏡設(shè)備(不含植入類重點(diǎn)監(jiān)管),6823醫(yī)用超聲儀器及有關(guān)設(shè)備,6824醫(yī)用激光儀器設(shè)備,6825醫(yī)用高頻儀器設(shè)備,6826物理***及康復(fù)設(shè)備,6828醫(yī)用磁共振設(shè)備,6830醫(yī)用x射線設(shè)備,6832醫(yī)用高能射線設(shè)備,6833醫(yī)用核素設(shè)備,6845體外循環(huán)及血液處理 設(shè)備,6854手術(shù)室、急救室、診療室設(shè)備及器具,6858醫(yī)用冷療、低溫、冷藏設(shè)備及器具,6864醫(yī)用衛(wèi)生材料及敷料,6866醫(yī)用高分子材料及制品(不含重點(diǎn)監(jiān)管),6870軟件,6877介入器材(不含重點(diǎn)監(jiān)管)***等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。力新儀器始終以質(zhì)量為發(fā)展,把顧客的滿意作為公司發(fā)展的動(dòng)力,致力于為顧客帶來(lái)***的數(shù)字化手術(shù)室,實(shí)驗(yàn)室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品。