PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DN段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。其特點是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學(xué)研究和實驗的常規(guī)方法,PCR實驗室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域,PCR實驗室主要實驗項目:檢測,乙型肝炎,禽疫病,基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。pcr實驗室設(shè)計建設(shè)中容易出現(xiàn)的問題:1、PCR實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行,防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。需要嚴格的通風(fēng)設(shè)計,若通風(fēng)設(shè)計不合理,會使風(fēng)速流向混亂,甚至危害人們健康。2、人流路徑與物流路徑設(shè)計不合理進入實驗室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑:公共清潔區(qū)——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——污染實驗區(qū)工作人員退出實驗室的路徑為:污染試驗區(qū)——緩沖間——淋浴間。 PCR可用于檢測特定細胞或生物體中等位基因的序列差異。實時熒光PCR儀制造廠家
PCR實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行,防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。風(fēng)速流向不得混亂。為了保證房間內(nèi)的壓差和避免污染,應(yīng)在空調(diào)面板處寫清楚送風(fēng)機和排風(fēng)機的開啟順序和關(guān)閉順序,先后順序不得混亂。空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5帕,潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差應(yīng)大于10帕,應(yīng)配備監(jiān)測靜壓差的設(shè)備,并定期監(jiān)控。一般情況下,試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染;可以通過控制進風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達到正壓效果。核酸擴增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通過控制排風(fēng)風(fēng)量大于進風(fēng)風(fēng)量達到負壓效果。理想情況下,PCR實驗室緩沖間內(nèi),可設(shè)置正壓,使室內(nèi)空氣不流向室外,室外空氣不流向室內(nèi)。PCR實驗室進風(fēng)由原有中央空調(diào)控制的要求將中央空調(diào)風(fēng)口安裝到指定定點。上海力康基因擴增PCR儀批發(fā)價格PCR擴增過程中,熒光定量PCR儀通過熒光信號,對PCR進程進行實時檢測。
硬件設(shè)計:二通道(X960A)和五通道(X960B)熒光檢測系統(tǒng),LED光源、高分辨率冷光源CCD;所有樣品同一時刻采集熒光信號;開放試劑、耗材平臺,通用性極強、全封閉樣品座設(shè)計。溫度控制系統(tǒng):模塊采用Peltier-Based技術(shù),擴增效率高,非特異性好-高達5℃/s的升降溫速率, 節(jié)省用戶的時間;高檢測靈敏度, 小可檢測到單個模板-具有兩種溫度控制模式,即模塊溫控和模擬管控,保證檢測的靈活性-良好的溫控均一性,有效降低了孔間差異,確保低拷貝樣品數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確測試。
PCR基因擴增法在遺傳性疾病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,其根本變化在于遺傳物質(zhì)。地中海貧血(Thalassemia)是一種遺傳性慢性溶血性貧血病,是世界上常見且發(fā)病比高的一種單基因遺傳病。在兩廣、貴州、四川等地發(fā)病率較高,在廣西等地高達15%。地中海貧血是由于基因突變造成珠蛋白的不平衡,使結(jié)構(gòu)正常的肽鏈合成量減少甚至沒有合成表現(xiàn)為溶血性貧血。接受累基因種類分為α、β、γ等,其中以α、β地貧為常見,危害了大。珠蛋白基因簇位于人6號染色短臂上,有兩個重復(fù)基因基因位于α1、α2、兩個α基因及其旁側(cè)序列有很大的同源性,易出現(xiàn)染色體不等交換,導(dǎo)致α基因缺失-α地貧。α地貧基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同時缺失及非缺失型地貧。可以應(yīng)用PCR技術(shù)擴增α1、α2基因從而檢測這些基因是否缺失、突變等,從而對α型地中海貧血作出診斷。β地中海貧血基因缺陷主要表現(xiàn)為基因序列中單一核苷酸的突變,或少數(shù)堿基的缺失、插入,使正常β珠蛋白肽鏈合成減注或缺失。應(yīng)用位點特異性寡核苷探針(Aso)進行PCR產(chǎn)物斑點雜交即可對其作出診斷。 普通PCR儀主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗、檢疫等。
而引物3’末端后5到6個核苷酸的錯配應(yīng)盡可能的少。如果3’末端的錯配過多,通過降低反應(yīng)的退火溫度來補償這種錯配不會有什么效果,反應(yīng)幾乎注定要失敗。引物3’末端的另一個問題是防止一對引物內(nèi)的同源性。應(yīng)特別注意引物不能互補,尤其是在3’末端。引物間的互補將導(dǎo)致不想要的引物雙鏈體的出現(xiàn),這樣獲得的PCR產(chǎn)物其實是引物自身的擴增。這將會在引物雙鏈體產(chǎn)物和天然模板之間產(chǎn)生競爭PCR狀態(tài),從而影響擴增成功。引物3’末端的穩(wěn)定性由引物3’末端的堿基組成決定,一般考慮末端5個堿基的ΔG。此值的大小對擴增有較大的影響,負值大,則3’末端穩(wěn)定性高,擴增效率更高,同時也更易于異位引發(fā)。需要注意的是,引物3’末端應(yīng)盡量避免T。實驗證明,以T結(jié)尾的引物即使與T,G或C錯配仍可有效延伸。⑥PCR產(chǎn)物的長度及在耙序列內(nèi)的位置所有的計算機程序都提供對PCR產(chǎn)物長度范圍的選擇。一般說來,PCR產(chǎn)物長度對擴增效率有影響。特定的應(yīng)用情況下,PCR產(chǎn)物長度部分取決于模板材料。預(yù)期產(chǎn)物的特定長度經(jīng)常取決于應(yīng)用的需要。若目的是建立測定特異DN段的臨床檢驗方法,120~300bp的小DNA擴增產(chǎn)物可能是好的。產(chǎn)物應(yīng)具有好的特異性和高的產(chǎn)生效率。 PCR也被應(yīng)用于目標(biāo)DNA的片段克隆,該技術(shù)被稱為 PCR 克隆。國產(chǎn)實時定量PCR儀價格比較
梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機構(gòu)。實時熒光PCR儀制造廠家
選擇該物種使用頻率高的密碼子,以降低引物的簡并性。③應(yīng)努力避免3’末端的簡并,對于大多數(shù)氨基酸殘基來說,意味著引物3’末端不要位于密碼子的第三位。④在一些多義位置使用脫氧次黃嘌呤(dI)代替簡并堿基。4.測序引物設(shè)計當(dāng)然,測序引物的設(shè)計一般都由測序公司來完成,如果需要自己設(shè)計的話;那么除了按照上面所提到的引物設(shè)計通用標(biāo)準(zhǔn)外,還需要注意兩點:①測序引物的特異性的標(biāo)準(zhǔn)掌握應(yīng)該更嚴格一些,也就是說設(shè)計時更優(yōu)先考慮特異性。因為在測序反應(yīng)中,如果引物與模板在非預(yù)期位置退火并引發(fā)鏈延伸,會對結(jié)果對來很大的干擾甚至造成結(jié)果無法識讀。②測序引物的Tm值適當(dāng)高一些。現(xiàn)在大部分測序反應(yīng)均選用耐熱的測序級DNA聚合酶來催化,并采用PCR的熱循環(huán)程序。選用的測序引物的Tm值稍高一些,有助于使反應(yīng)順利跨過待測模板的二級結(jié)構(gòu)區(qū),也有助于降低非特異反應(yīng)。5.探針的設(shè)計探針的設(shè)計,根據(jù)不同的用途各有其設(shè)計特點,這里只是就通用的原則進行討論:①探針的長短一般在20-50核苷酸之間,過長合成成本高,且易出現(xiàn)聚合酶合成錯誤,雜交時間長。太短則特異性下降。②注意G和C的含量努力控制在40-60%,同時一種堿基連續(xù)重復(fù)不超過4個,以免非特異性雜交產(chǎn)生。 實時熒光PCR儀制造廠家
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