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上海細胞培養支原體去除貨期

來源： 發布時間：2024-06-11

支原體污染的來源主要包括以下幾個方面：
1. 實驗室環境中可能存在支原體污染源，如空氣中的塵埃、其他培養物中的支原體污染等。
2. 實驗操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體，造成細胞培養的污染。
3. 培養基、血清等培養材料如果受到支原體污染，也會導致細胞培養物受到污染。
4. 細胞交叉污染，即使用已受污染的細胞株進行培養時，可能會污染其他細胞。
5. 實驗器材帶來的污染，如未徹底消毒滅菌的實驗器材。
6. 人體是某些支原體的正常菌群，因此操作人員的疏失也可能成為污染源。
7. 細胞庫管理不善，造成實驗室間的相互污染。
8. 細胞培養過程中的細菌、酵母或霉菌污染在光學顯微鏡下可見，但支原體污染在光學顯微鏡下通常不可見，必須通過特定的檢測方法進行檢測
支原體污染如何預防？上海細胞培養支原體去除貨期

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支原體污染是細胞培養中普遍的問題之一，細胞庫中或正在使用的細胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養細胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養：支原體的污染會阻礙細胞生長和增殖 
02/ 改變蛋白質、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導和形態 
04/ 損害膜和細胞器 
05/ 導致突變和染色體變化 
06/ 時間、金錢和有價值的細胞丟失：支原體的污染會導致嚴重的經濟損失以及研究時間損失
07/ 實驗結果的不可靠性 
08/ 生物安全問題
杭州細胞支原體檢測時間支原體的檢測方法有哪些？

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qPCR法，即定量聚合酶鏈式反應（Quantitative Polymerase Chain Reaction）法，是一種高度靈敏和特異的分子生物學技術，用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中，qPCR法的原理主要包括以下幾個步驟：
1. DNA提?。菏紫葟拇郎y樣本中提取DNA，這可能包括細胞培養上清液或組織樣本中的支原體DNA。
2. 設計特異性引物：針對支原體的保守DNA序列，如16S rRNA基因，設計特異性的DNA引物。
3. 熒光標記探針：使用熒光標記的探針，該探針與目標DNA序列互補，能夠在PCR擴增過程中與擴增的DNA結合。
4. Ct值確定：Ct值（閾值循環數）是指在PCR反應中，熒光信號強度超過預定閾值的循環次數。Ct值越低，表示樣本中支原體DNA的量越多。
5. 定量分析：通過標準曲線法或相對定量法，將Ct值轉換為支原體DNA的定量結果。
qPCR法的優勢在于其高靈敏度和特異性，能夠檢測到非常低水平的支原體污染，并且可以在短時間內提供結果，這對于需要快速檢測的生物制品生產和細胞培養質量控制非常重要

細胞培養中支原體檢測出現假陽性結果可能由以下原因引起：
1. 擴增產物污染：PCR擴增產生的大量DNA拷貝若未妥善處理，極微量的污染就可能導致假陽性結果。
2. 引物設計不當：引物設計不夠特異性，可能會與非目標序列發生反應，導致非特異性擴增。
3. 試劑質量問題：使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質量不佳，可能引起非特異性擴增或假陽性結果。
4. 操作技術問題：實驗操作不規范，如混合樣本、標簽錯誤或樣本標識不清等，可能導致假陽性結果。
5. PCR反應條件設置不當：不恰當的PCR反應條件，如溫度和時間選擇不當，可能導致非特異性擴增。
6. DNA污染：PCR環境中的DNA污染會干擾結果，導致假陽性
細胞培養中支原體預防措施。

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支原體檢測中的PCR法和LAMP方法各有其優勢和劣勢，以下是兩種方法的比較：

PCR法
優勢:
1.高靈敏度：PCR法可以擴增支原體DNA，具有很高的靈敏度。
2.操作簡便：PCR操作相對簡單，結果準確，速度快，通常3個小時左右即可得到結果。
3.可靠性：PCR法已成為日常細胞培養維護的可靠方法，是細胞樣本庫保護細胞的方法。
劣勢:
1. 樣品量需求：相對于某些快速檢測方法，PCR可能需要較多的樣品量。
2. 檢測周期：盡管PCR法相對快速，但在某些情況下，檢測周期可能較長。
LAMP法
優勢:
1. 設備簡單：只需要一個穩定的恒溫環境，如恒溫水浴或熱擬溫器，不需要復雜的溫度控制設備。
2. 高特異性：LAMP技術采用多個特異性引物，提供了較高的特異性。
3. 結果可視化：LAMP擴增產物可形成肉眼觀察的顏色產物，有助于直接觀察擴增結果。
劣勢:
1. 引物設計復雜：需要設計多個引物，包括外部引物、內部引物和環引物，引物設計較為復雜。
2. 避免污染：由于沒有封閉系統，避免污染造成的假陽性是一個問題。
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支原體污染一旦發生，不僅對細胞培養造成嚴重影響，甚至可能導致實驗結果失真。而且支原體污染在細胞培養實驗中相當常見。因此，預防措施是確保細胞培養環境和實驗結果可靠性的重要手段。
01/ 良好的無菌技術及實驗操作，保證操作不會引入新的污染
02/ 保持實驗空間的清潔
03/ 確保從可靠的來源獲取細胞，減少不同細胞之間的交叉傳染
04/ 防止交叉污染
05/ 減少氣溶膠生成
06/ 謹慎使用抗*素
07/ 定期支原體篩查
08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細胞
09/ 保持良好的記錄
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上海世途科生物(CYTOCH)是一家生命科學上游工具類企業。聚焦于細胞生物學相關的化學技術及相關產品的開發與生產，產品覆蓋細胞培養產品如胎牛血清，支原體檢測，支原體去除試劑等，細胞轉染產品如轉染試劑，及細胞檢測產品如增殖凋亡檢測，報告基因等多個科研場景，給終端客戶提供良好的產品以及服務。

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