考慮細胞毒性低細胞毒性的轉染試劑對于保持細胞的活性和正常生理功能至關重要。評估細胞活力：可以通過檢測細胞的存活率、增殖能力等指標來評估轉染試劑的細胞毒性。在研究不同轉染試劑對C2C12細胞的轉染效率時，通過優化DNA:轉染劑比例和細胞密度，使所有試劑在達到較高轉染效率的同時，對細胞生長和活力的影響有限6。在比較不同轉染試劑遞送siRNA的攝取、敲低效率和毒性情況的研究中，新開發的CALNPRNAi轉染試劑轉染效率***高于傳統轉染試劑，同時毒性比較低7。選擇溫和的試劑：一些轉染試劑可能對細胞的毒性較小，例如基于脂質的轉染試劑通常比基于病毒的轉染試劑更溫和。在顱內遞送合成mRNA的研究中，使用常用的轉染試劑將合成mRNA遞送至小鼠大腦，結果表明該模型中合成mRNA可以成功遞送至大腦，且沒有可測量的毒性8。用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化，這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。新疆長沙轉染試劑

魚精蛋白作為RNA遞送穩定劑具有重要作用，其具體作用機制主要包括以下幾個方面：一、保護RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負電荷的RNA通過相反電荷驅動耦合23。在生物系統中，RNA很容易被RNase降解，而魚精蛋白可以與RNA復合，形成穩定的復合物，從而保護RNA免受降解1213。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復合，可以穩定陰離子RNA1213。二、增強細胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護RNA，還能增強RNA的穿透細胞的能力。魚精蛋白-RNA復合物的形成具有雙重功能，一方面保護RNA不被降解，另一方面增強其穿透進入細胞的能力23。這種增強的細胞穿透性可能是由于魚精蛋白的陽離子性質，使其能夠與細胞膜相互作用，促進RNA的進入細胞2。中國香港PEI 轉染試劑基因是陽離子聚合物作為轉染劑的主要應用。

網格蛋白介導的內吞途徑呼吸道合胞病毒（RSV）是導致嬰幼兒***的主要病毒病原體。研究表明，網格蛋白介導型內吞途徑是目前研究得較為透徹且經典的病毒入胞途徑。其中網格蛋白在此途徑中的地位很重要。通過針對網格蛋白重鏈的小干擾RNA（siRNA）抑制網格蛋白的表達，可以有效的抑制RSV***Hela細胞。這提示網格蛋白介導的內吞途徑在病毒感染細胞過程中發揮重要作用，同時也暗示了在某些情況下，RNA轉染試劑可能利用這一途徑進入細胞21。二、小窩蛋白介導的內吞途徑在研究非病毒載體用于小干擾RNA（siRNA）遞送時發現，將用組氨酸和半胱氨酸修飾的HIV-1Tat肽（mTat）與聚乙烯亞胺（PEI）結合，并與陽離子兩親脂質基試劑INTERFERin（INT）組合成的雜合載體（mTat/PEI/INT）能高效遞送siRNA。研究表明，FilipinIII和β-環糊精（小窩蛋白介導的內吞作用抑制劑）能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉染，而氯丙嗪（網格蛋白介導的內吞作用抑制劑）則不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉染。此外，mTat/PEI/INT在4°C時的轉染效率明顯低于37°C。這些結果表明，mTat/PEI/INT作為一種潛在的有吸引力的非病毒載體用于siRNA遞送，其轉染過程可能是通過小窩蛋白介導且依賴溫度的內吞途徑實現的。

轉染時間對奶牛子宮內膜原代上皮細胞轉染的影響：在奶牛子宮內膜原代上皮細胞中，應用帶有FAM標記的miRNA-185mimics為報告基因，檢測兩種不同轉染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細胞接種不同時間后的轉染效率33。結果顯示，無論使用哪種轉染試劑，12h的轉染效率均極***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉染試劑時，12h的熒光強度也比較高。這說明在奶牛子宮內膜原代上皮細胞中，選擇合適的轉染試劑和轉染時間可以提高轉染效率。同時，該研究未明確轉染對細胞死亡的影響，但可以進一步研究不同轉染條件下細胞的存活率，以確定在提高轉染效率的同時降低細胞死亡的比較好條件。PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。

對細胞周期的影響：在微小RNA-1180轉染腎*細胞的實驗中，FCM結果顯示，轉染miR-1180后，位于G0/G1期的細胞比例明顯增大，而位于S期和G2/M期的細胞比例明顯下降，表明細胞周期被阻滯在G0/G1期1。對轉染效率的影響：在脂質體介導RNA干擾質粒轉染雞成骨細胞條件的優化實驗中，對轉染前細胞融合度、質粒質量與脂質體體積比及轉染時間進行優化，在熒光倒置顯微鏡下觀察并計算轉染效率。結果表明，在轉染前細胞融合達到90％以上，質粒DNA與脂質體比例為1:2.5時轉染效率比較高，并且在轉染后48h轉染效果比較好3。在篩選更優的脂質體轉染試劑的實驗中，分別用RNAiMax及MessageMax將modGFP轉染入MEF細胞，流式分析發現MessageMax的轉染效率為（83.33%±3.23%），略高于RNAiMax的（78.77%±6.12%），兩者沒有統計學差異，但是流式分析和熒光顯微鏡觀察均表明MessageMax轉染后1周內的蛋白翻譯表達效率更高，是更高效的modRNA轉染試劑8。

RNA 轉染試劑的效果受到多種因素的影響，包括細胞類型、轉染試劑種類、轉染條件等。在實際應用中，需要根據具體的實驗需求選擇合適的轉染試劑和優化轉染條件，以提高轉染效率并減少對細胞的毒性作用。 研究已經確定了陽離子脂質體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內轉運核酸的能力。西藏shRNA轉染試劑

在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下。新疆長沙轉染試劑

    考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實驗成本，同時也可以減少對細胞的潛在毒性。比較不同試劑的RNA用量：不同的轉染試劑可能需要不同量的RNA才能達到相同的轉染效果。在選擇比較好的RNA轉染試劑并將其與電穿孔法進行病毒RNA的比較的研究中，某些商業轉染試劑在適當優化后，細胞死亡少得多，RNA需求少，轉染效率提高3。考慮實驗規模：如果實驗需要大量轉染細胞，那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本。例如，在大規模的細胞培養實驗中，選擇RNA需求少的轉染試劑可以節省成本和資源。四、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉染試劑可以簡化實驗操作，提高實驗的可重復性。血清對轉染的影響：一些轉染試劑在有血清的情況下可能會降低轉染效率，而另一些試劑則可以在血清存在的情況下正常工作。在比較不同商業RNA轉染試劑將黃熱病病毒（YFV）和丙型肝炎病毒（HCV）RNA復制子遞送至Huh7細胞的能力的研究中，討論了與高效轉染相關的因素，以及在存在血清的情況下能夠遞送RNA的優勢3。選擇血清兼容的試劑：如果實驗需要在有血清的條件下進行，那么選擇血清兼容的轉染試劑是必要的。例如，在一些細胞培養實驗中，血清是細胞生長所必需的。 新疆長沙轉染試劑