在人類多能干細胞衍生的心肌細胞(HPSC-CMs)中的應用低轉染效率是實現HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復研究中廣泛應用的障礙。通過優化四個基本參數,即血清補充劑、復制和轉染之間的時間、試劑與DNA比以及細胞密度,使用Promega的Viafect?轉染試劑能夠將HPSC-CMs轉染至約95%的效率28。盡管活力有所降低,但轉染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結構完整性,確保了至少14天的轉染基因持續表達,為心臟相關疾病的研究開辟了新機遇。在C2C12細胞中的應用C2C12細胞在肌肉領域***使用,但它們和原代成肌細胞一樣難以轉染,影響了下游實驗。雖然自2015年以來超過95%的使用C2C12細胞的報告使用了一種金標準轉染劑(如Lipofectamine®),但有研究表明其效率低于30%。通過比較五種商業試劑(Lipofectamine®3000、Viafect?、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®)在C2C12細胞中的轉染效率,發現通過優化DNA:轉染劑比例和細胞密度,所有試劑都能達到超過60%的轉染效率,且對細胞生長和活力影響有限。這些試劑還能在C2C12細胞中轉染后高效生成GFP陽性的肌管,但在轉染siRNA和對原代肌肉細胞的轉染中表現出較低效率和較高毒性3。小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。DOTAP 轉染試劑公司
在核酸遞送中的應用核酸***可以通過基因增強、基因抑制和基因組編輯實現持久甚至***的效果。然而,裸核酸分子難以進入細胞,陽離子聚合物作為非病毒核酸遞送系統,其分子上帶有正電荷基團,可濃縮核酸分子形成納米顆粒,幫助核酸跨越屏障在細胞中表達蛋白質或抑制目標基因表達。陽離子聚合物易于合成、修飾和結構控制,是一類有前途的核酸遞送系統7。在顱內遞送合成mRNA中的應用在本研究中,使用常用的轉染試劑建立了顱內遞送合成mRNA的小鼠模型。將合成的熒光素酶mRNAs用兩種不同的轉染試劑包裹后定點微注射到大腦中,通過小動物成像系統監測遞送的mRNA的表達狀態,并通過行為和血液生化測量評估可能的試劑誘導的生物毒性。該模型表明,合成mRNA可以用常用的轉染試劑成功遞送到大腦中,且沒有可測量的毒性,外源性mRNA的表達在顱內注射后在合理的時間內持續存在。合成修飾的TRAILmRNA也被用作***應用的例子9。江西青島轉染試劑轉染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉染效率的潛在因素。
X射線發光成像技術結合了X射線成像的高空間分辨率和光學成像的高測量靈敏度,可用于小動物成像。小動物的X射線發光成像:MichaelCLun、WenxiangCong和Md.Arifuzzaman綜述了兩種類型的X射線發光計算斷層掃描(XLCT)成像方法,并介紹了他們正在建立的聚焦X射線發光斷層掃描(FXLT)成像系統7。該系統將開發基于機器學習的FXLT重建算法,并合成不同發射波長的納米級磷光劑。四、近紅外高光譜成像技術近紅外高光譜成像技術在動物飼料成分分析中具有應用前景。NIRhyperspectralimagingforanimalfeedingredientapplications:P.Dantes探索了近紅外高光譜成像(NIRHSI)在動物飼料中的應用8。該技術能夠在像素級別提供樣品的化學成分信息,相比傳統的近紅外光譜具有優勢。研究中使用CorningNIRHSI儀器預測了豆粕中的蛋白質和油含量,并可視化了整個豆粕樣品中預測的蛋白質分布。預處理方法如標準正態變量和Savitzky-Golay導數能夠有效提高校準模型性能。此外,還將NIRHSI儀器與兩種商業單點近紅外光譜儀進行了比較。
脂質體組成:脂質體的組成對轉染效率有重要影響。不同的脂質體可能具有不同的電荷性質、大小和穩定性,這些因素都會影響脂質體與細胞的相互作用。陽離子脂質體通常具有較高的轉染效率,因為它們可以與帶負電荷的DNA結合,并通過靜電作用與細胞表面結合。例如,Lipofectamine2000和Lipofectamine3000都是常用的陽離子脂質體,它們在不同類型的細胞中都表現出較高的轉染效率11316。脂質體的組成還可能影響其在細胞內的釋放和穩定性。一些脂質體可能更容易被細胞內的酶降解,從而降低轉染效率。與DNA轉染類似,RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。
在鯉上皮瘤細胞中的應用在鯉上皮瘤細胞進行基因功能研究時,轉染試劑和DNA的劑量以及取樣時間缺乏統一的數據支持。選取兩種常用轉染試劑Lipofectamine®2000和FuGENE®HD進行多配組轉染試驗,在28℃,以35mm培養皿鋪板,16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在轉染后48h達到比較高轉染效率(±)%;12μLFuGENE®HD和4μgDNA在轉染72h后轉染效率達到(±)%。通過構建鯉高不飽和脂肪酸合成相關轉錄因子過氧化物酶體增殖物***受體蛋白α(PPARα)的EGFP標簽載體進行驗證,兩種轉染試劑分別獲得了約4%和約8%的轉染效率,并對下游脂肪酸去飽和酶2(fads2)基因的轉錄調控效應進行檢測,結果為后續利用鯉上皮瘤細胞進行基因功能研究提供了數據支持5。在巨噬細胞中的應用商業轉染試劑Lipofectamine已***用于核酸的細胞質遞送和與細胞內先天免疫傳感器進行細胞源嚙合,以觸發I型干擾素(IFN)生產。然而,單獨對IIFN響應的脂質切積胺的影響尚未詳細研究。研究表明,Lipofectamine誘導在原始,I型IFN誘導依賴于干擾素調節因子(IRF)3和IRF7,并且部分需要達洛/白細胞介素-1受體-含有結構域的適配器誘導的干擾素-β。相比之下,轉染試劑XFECT未***IIFN信令6。 在腺病毒載體或脂質體的全身遞送后,轉基因表達相對短暫。安徽shRNA轉染試劑
用二乙基氨基乙基修飾,右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化,這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。DOTAP 轉染試劑公司
RNA轉染試劑是一類能夠將RNA分子導入細胞內的物質,其作用原理主要涉及以下幾個方面。利用電荷相互作用:許多RNA轉染試劑是陽離子性的,它們可以與帶負電荷的RNA分子通過靜電相互作用結合形成復合物。例如,魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物,由于相反電荷驅動的耦合作用,被用于細胞內核酸的遞送8。魚精蛋白不僅可以保護RNA免受生物系統中的降解,還能增強其對細胞的穿透能力。陽離子脂質體也是常見的轉染試劑之一。以LipofectamineTM2000為例,它可以介導攜帶綠色熒光蛋白基因的真核表達載體轉染至雞成骨細胞9。陽離子脂質體通過其陽離子頭部與RNA的負電荷相互作用,形成脂質體-RNA復合物,然后通過與細胞膜的融合或內吞作用將RNA導入細胞內。內吞作用途徑:一些RNA轉染試劑通過內吞作用進入細胞。如合成的8-mer兩親性反式多聚2'-O-甲基尿苷硫代磷酸三酯RNA元件(2'-OMeUtaPS),它能介導將不帶電荷的聚A尾磷酸二酰胺基嗎啉代序列(PMO)高效遞送至HeLapLuc705細胞或肌管肌肉細胞。已確定大胞飲作用是HeLapLuc705細胞中使用的主要內吞途徑。DOTAP 轉染試劑公司